загрузка...

Лабораторные методы исследования витаминов. Определение аскорбиновой кислоты в моче по Тильмансу

Принцип метода. Методика основана на реакции восстановления 2,6-дихлорфенолиндофенола в кислой среде в присутствии аскорбиновой кислоты в лейкоформу. При этом аскорбиновая кислота окисляется в дигидроаскорбиновую. О завершении окислительно-восстановительного процесса свидетельствует появление розового окрашивания титруемого раствора после добавления очередной капли 2,6-дихлорфенолиндофенола.

Реактивы:

1. 1/15 М раствор дигидрофосфата калия (КН2РО4): 9,078 г КН2РО4 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 1 л дистиллированной водой.

2. 1/15 М раствор гидрофосфата натрия (Na2HP04): 11,876 г кристаллогидрата Na2HP04x2H2O растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 1 л дистиллированной водой.

3. 0,1 н. раствор серной кислоты (H2S04).

4. 2 М раствор соляной кислоты.

5. Насыщенный раствор оксалата аммония: 10 г сухого реактива заливают 100 мл дистиллированной воды при комнатной температуре, перемешивают до растворения.

6. 50% раствор серной кислоты (H2S04): концентрированную серную кислоту (относительная плотность 1,84) разводят дистиллированной водой в соотношении 1:2.

7. 0,01 н. раствор оксалата натрия (Na2C204) для проверки титра 0,01 н. раствора перманганата калия (КМпО4). Ввиду того, что соль гигроскопична, ее необходимо поместить на несколько часов в эксикатор с концентрированной серной кислотой, бюкс или чашечку с реактивом оставляют открытой. Для приготовления 0,1 н. раствора берут не менее 2-3 навесок. Используют свежеприготовленный раствор. Навески в количестве 67 мг переносят в мерные колбы на 100 мл, растворяют в бидистиллированной воде, доводят объем до метки, перемешивают.

8. 0,01 н. раствор перманганата калия (КМпО4): готовят из фиксанала или берут навеску в количестве 316 мг, которую растворяют в мерной колбе на 1 л сначала в небольшом количестве дистиллированной воды (200300 мл), а затем доводят объем до метки и тщательно перемешивают. До проверки титра реактив необходимо выдержать 10-14 дней, поскольку в свежеприготовленном растворе титр неустойчив.

9. 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола (краска Тильманса). Готовят более концентрированный раствор краски Тильманса, так как реактив неустойчив при хранении: 0,3 г 2,6-дихлорфенолиндофенола растворяют в 500 мл горячей дистиллированной воды, энергично взбалты
вают и оставляют на несколько часов или до следующего дня для лучшего растворения. В целях удлинения срока хранения к краске Тиль- манса прибавляют 120 мл 1/15 М раствора дигидрофосфата калия (КН2РО4) и 180 мл 1/15 М раствора гидрофосфата натрия (Na2HP04), перемешивают и доводят объем дистиллированной водой до 1 л. Тщательно перемешивают и фильтруют. Приготовленную таким образом краску Тильманса можно хранить в течение 12-14 дней в посуде из темного стекла на холоде. В дни проведения исследований титр 2,6- дихлорфенолиндофенола обязательно уточняют по 0,01 н. раствору соли Мора.

10.0,01 н. раствор соли Мора: навеску сухой соли Мора - 392 мг - переносят в мерную колбу на 100 мл и добавляют 5 мл 0,1 н. раствора серной кислоты, растворяют и доводят объем дистиллированной водой до метки.

Содержимое колбы тщательно перемешивают. Хранят в посуде из темного стекла на холоде.

Проверка титров реактивов:

1. 0,01 н. раствор перманганата калия (КМпО4): в колбу на 50 мл вносят 10 мл 0,01 н. раствора оксалата натрия и 2,5 мл 50% раствора серной кислоты, перемешивают и нагревают на водяной бане почти до кипения. Затем титруют 0,01 н. раствором перманганата калия до появления слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 30 сек. Коэффициент поправки для 0,01 н. раствора перманганата калия рассчитывают по формуле:

а

----- , где

V х 0,067

а - навеска оксалата натрия, г;

V - объем 0,01 н. раствора перманганата калия, израсходованного на титрование, мл;

0, 067 - количество раствора оксалата натрия (Na2Ca04), соответствующее 1 мл 0,01 н. раствора перманганата калия (КМпО4), мл.

2. 0,01 н. раствор соли Мора: в колбу на 50 мл отбирают 10 мл раствора соли Мора, доливают 1,5 мл 50% раствора серной кислоты (H2S04), перемешивают и титруют 0,01 н. раствором перманганата калия (КМпО4) до стойкого слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Поправку к титру соли Мора (K1) рассчитывают по формуле:

V X 10 ,

V - объем 0,01 н. раствора перманганата калия, пошедшего на титрование, мл;

10 - объем соли Мора, мл;

К - коэффициент поправки для 0,01 н. раствора перманганата калия (КМпО4).

3. Краска Тильманса: в пробирку Хагедорна отбирают 10 мл 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, добавляют 5 мл насыщенного раствора оксалата аммония и титруют 0,01 н. раствором соли Мора до изменения синей окраски на соломенно-желтую (нерезкая перемена окраски указывает на непригодность краски Тильманса). Коэффициент поправки для краски Тильманса рассчитывают по формуле:

К2= V х Ki, где

V - объем раствора соли Мора, пошедшего на титрование, мл;

К1 - коэффициент поправки к титру соли Мора.

Ход определения.

1. В пробирку Хагедорна отбирают 5 мл мочи, приливают 10 мл дистиллированной воды, перемешивают и подкисляют мочу 2% раствором соляной кислоты.

2. Титруют 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Титровать рекомендуется при дневном освещении, используя белый фон. Для того чтобы точнее уловить момент окончания титрования, ставят параллельные пробы для сравнения окраски.

Расчет содержания аскорбиновой кислоты в суточном объеме мочи ведут по формуле:

К 2 X а x 0,088 xV 5

X - содержание аскорбиновой кислоты, мг;

а - количество 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование 5 мл мочи, мл;

К2 - коэффициент поправки к титру краски Тильманса;

0, 088 - количество аскорбиновой кислоты, восстанавливающее 1 мл краски Тильманса, мг;

V - суточный объем мочи, мл;

5 - объем мочи, взятой для исследования, мл.

В норме суточная экскреция аскорбиновой кислоты у практически здоровых людей составляет 30-40 мг/сут, или 0,11-0,22 ммоль/сут.

<< | >>
Источник: Савченко А.А.. Витамины как основа иммунометаболической терапии / А.А. Савченко, Е.Н. Анисимова, А.Г. Борисов, А.Е. Кондаков. - Красноярск: Издательство КрасГМУ2011. 2011

Еще по теме Лабораторные методы исследования витаминов. Определение аскорбиновой кислоты в моче по Тильмансу:

  1. Определение аскорбиновой кислоты в сыворотке крови по Тильмансу
  2. Витамин С (аскорбиновая кислота, антискорбутный)
  3. Определение 4-пиридоксиловой кислоты в моче по Хуффу и Перлцвейгу
  4. Определение тиамина (витамина Ві) в моче по Вангу и Харрису
  5. Определение рибофлавина (витамина В2) в моче по Е.М. Масленниковой и Л.Г. Г воздовой
  6. ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ СЫРЬЕ, СОДЕРЖАЩИЕ АСКОРБИНОВУЮ КИСЛОТУ (ВИТАМИН С)
  7. Тарифы на лабораторные исследования и определение рыночной стоимости лабораторных услуг
  8. ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  9. ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  10. Медово-лимонный состав с аскорбиновой кислотой
  11. Лабораторные методы исследования
  12. Определение N-метилникотинамида в моче по Хуффу и Перлцвейгу
  13. ИНСТРУМЕНТАЛЬНЫЕ И ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. Рентгенологические и радиологические методы
  14. Витамин В3 (пантотеновая кислота)
  15. Витамин N (липоевая кислота)
  16. Гиповитаминоз никотиновой кислоты (витамина PP)
  17. Витамин В15 (пангамовая кислота)