загрузка...

Определение ретинола (витамина А) и каротиноидов в сыворотке крови по Бессей в модификации Л. А. Анисимовой

Принцип метода: Определение витамина А и каротиноидов основано на их гидролизе в щелочном спиртовом растворе с последующей экстракцией смесью органических растворителей.

Реактивы.

1. 11 М раствор гидроксида калия (КОН).

2. 96% этиловый спирт.

3. 1 М раствор гидроксида калия (КОН) в 96% этиловом спирте: 1 объем 11 М раствора КОН смешивают с 10 объемами 96% этилового спирта. Реактив готовят в день проведения исследования. Если при смешивании появляется окрашивание, спирт перед использованием следует очистить перегонкой.

4. Ксилол, х.ч.

5. Октан, х.ч.

6. Ксилол-октановая смесь: готовят путем смешивания равных объемов ксилола и октана.

Исследования проводят на спектрофотометре.

Ход определения.

Взятую из пальца кровь (около 1 мл) вносят в центрифужную пробирку и ставят на 20-30 мин в стеклянный стаканчик с теплой водой (температура 40-45° С). Для отделения сыворотки сгусток крови осторожно обводят тонкой стеклянной палочкой по краю у стенок пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

Отбирают 0,12 мл сыворотки и переносят в агглютинационную пробирку, куда затем добавляют 0,12 мл 1 М спиртового раствора гидроксида калия. Содержимое тщательно встряхивают.

Пробирки с пробами ставят в водяную баню на 20 мин при температуре 60° С для проведения гидролиза.

Пробы охлаждают и к ним приливают по 0,12 мл ксилол-октановой смеси, интенсивно встряхивают в течение 10—15 с. Вновь охлаждают и центрифугируют.

Осторожно извлекают пастеровской пипеткой с резиновым баллончиком верхний слой, содержащий витамин А и каротиноиды, и переносят в микрокюветы.

Пробы спектрофотометрируют при длине волны 328 нм - для определения витамина А, и при длине волны 460 нм - для определения каротиноидов.

После спектрофотометрии исследуемые пробы подвергают ультрафиолетовому облучению для разрушения витамина А. Для этих целей на расстоянии 15-20 см от микрокювет устанавливают кварцевую (бактерицидную) лампу таким образом, чтобы облучению подвергалась часть кюветы, заполненной жидкостью; время облучения 45-60 мин.

Пробы повторно спектрофотометрируют при длине волны 328 нм. Содержание витамина А определяют по разности величин экстинкций (оптической плотности) с учетом коэффициента (фактора) 637, вычисленного Bessey для витамина А.

Расчет проводят по формуле:

X = 637 X (Е328(1) - Е328(2)Х

где X - содержание витамина А, мкг/дл; 637 - коэффициент, вычисленный Bessey для определения витамина А; Е328(1) - оптическая плотность раствора до облучения; Е328(2)- оптическая плотность раствора после облучения.

Коэффициент для перевода концентрации витамина А из мкг/дл в мкмоль/л - 0,035.

Содержание каротиноидов рассчитывают по формуле:

X = 48О-Е480,

где X - содержание каротиноидов, мкг/дл; 480 - коэффициент, вычисленный Bessey для определения каротиноидов; Е480 - оптическая плотность исследуемого раствора.

Примечание. Согласно данным Bessey, при проведении исследований можно брать больший или меньший объем сыворотки, однако соотношение его с объемом спиртового раствора должно быть постоянным при любом изменении объема (количества) ксилол-октановой смеси.

Норма в содержании витамина А в сыворотке крови составляет: у новорожденных и грудных детей - 160-270 мкг/л; у взрослых - 1,05-2,45 мкмоль/л (300-700 мкг/л). Содержание каротиноидов в сыворотке крови взрослых - 800-2300 мкг/л.

<< | >>
Источник: Савченко А.А.. Витамины как основа иммунометаболической терапии / А.А. Савченко, Е.Н. Анисимова, А.Г. Борисов, А.Е. Кондаков. - Красноярск: Издательство КрасГМУ2011. 2011

Еще по теме Определение ретинола (витамина А) и каротиноидов в сыворотке крови по Бессей в модификации Л. А. Анисимовой:

  1. Определение токоферола (витамина Е) в крови в модификации Фридемана
  2. Определение аскорбиновой кислоты в сыворотке крови по Тильмансу
  3. Определение рибофлавина (витамина В2) в крови по Берчугу, Бессею и Лоури
  4. Витамин А (ретинол)
  5. Содержание железа в сыворотке крови у здоровых лиц различных возрастных групп
  6. Савченко А.А.. Витамины как основа иммунометаболической терапии / А.А. Савченко, Е.Н. Анисимова, А.Г. Борисов, А.Е. Кондаков. - Красноярск: Издательство КрасГМУ2011, 2011
  7. Определение газового состава крови
  8. Определение иммуноглобулинов в крови
  9. Глава 1 Определение группы крови по системе аво и резус-фактора
  10. Определение тиамина (витамина Ві) в моче по Вангу и Харрису
  11. Определение рибофлавина (витамина В2) в моче по Е.М. Масленниковой и Л.Г. Г воздовой
  12. Лабораторные методы исследования витаминов. Определение аскорбиновой кислоты в моче по Тильмансу
  13. Воздействие каротиноидов
  14. Тетратерпеноиды — каротиноиды
  15. Глава 48. Судебно-медицинское исследование крови. 48.1. Экспертиза пятен крови