Определение рибофлавина (витамина В2) в крови по Берчугу, Бессею и Лоури

Принцип метода. Методика основана на экстракции с помощью ТХУ различных форм рибофлавина из крови с последующим кислотным гидролизом флавинадениндинуклеотида (ФАД) и флюориметрическим определением содержания общего рибофлавина.

Реактивы.

1. 10% ТХУ.

2. 4 М раствор гидрофосфата калия (К2НРО4).

3. 5% раствор гидрокарбоната натрия (NaHCO3).

4. 10% раствор дитионита натрия (Na2S204) в 5% растворе гидрокарбоната натрия ^аНСО3). Г отовят непосредственно перед употреблением.

5. Стандартный раствор рибофлавина: 2 мг рибофлавина растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, доводят объем до метки дистиллированной водой. 1 мл раствора содержит 20 мкг витамина В2.

Ход определения.

1 мл оксалатной крови сразу после взятия помещают в центрифужную пробирку, куда прибавляют 9 мл 10% раствора ТХУ, хорошо перемешивают и оставляют на 1 ч в темноте, после чего пробу центрифугируют.

Отбирают прозрачную надосадочную жидкость и помещают в термостат при 37-38'С на 20 ч (или оставляют при комнатной температуре на 2 суток) для гидролиза ФАД.

Затем отбирают 4 мл, переносят в чистую пробирку, проводят нейтрализацию, добавляя к 4 мл гидролизата 1 мл 4 М раствора гидрофосфата калия, и оставляют на 1-2 ч в темноте.

Измеряют флюоресценцию нейтрализованного раствора с использованием первичных и вторичных светофильтров для витамина В2 - первое измерение.

Затем к пробе прибавляют 0,1 мл рабочего стандартного раствора и повторно измеряют флюоресценцию, после чего гасят флюоресценцию добавлением 0,5 мл 10% раствора гидросульфита натрия.

Вновь измеряют флюоресценцию пробы.

Расчет ведут по формуле:

X = 20ЛРІ-Р) х100, где

(Р2 - Р1) х 5

X - содержание рибофлавина, мкг/дл;

20 - содержание рибофлавина в стандартном растворе с учетом разведения, мкг/мл;

Р1, Р2, Рз - последовательные показания измерений флюоресценции пробы;

100 - пересчет на 100 мл;

5 - объем испытуемого раствора, мл.

Коэффициент для перевода содержания рибофлавина из мкг/дл в нмоль/л - 0,033.

В норме содержание рибофлавина в цельной крови составляет 328 нмоль/л (12 мкг/дл).

<< | >>
Источник: Савченко А.А.. Витамины как основа иммунометаболической терапии / А.А. Савченко, Е.Н. Анисимова, А.Г. Борисов, А.Е. Кондаков. - Красноярск: Издательство КрасГМУ2011. 2011

Еще по теме Определение рибофлавина (витамина В2) в крови по Берчугу, Бессею и Лоури:

  1. Определение рибофлавина (витамина В2) в моче по Е.М. Масленниковой и Л.Г. Г воздовой
  2. Определение токоферола (витамина Е) в крови в модификации Фридемана
  3. Определение ретинола (витамина А) и каротиноидов в сыворотке крови по Бессей в модификации Л. А. Анисимовой
  4. Витамин В2 (рибофлавин)
  5. Определение газового состава крови
  6. Определение иммуноглобулинов в крови
  7. Определение аскорбиновой кислоты в сыворотке крови по Тильмансу
  8. Глава 1 Определение группы крови по системе аво и резус-фактора
  9. Определение тиамина (витамина Ві) в моче по Вангу и Харрису
  10. Лабораторные методы исследования витаминов. Определение аскорбиновой кислоты в моче по Тильмансу
  11. Глава 48. Судебно-медицинское исследование крови. 48.1. Экспертиза пятен крови
  12. Обеспечение витаминами процессов синтеза в клетке. Показания и противопоказания к назначению витамина С
  13. Применение витаминов при регуляции энергетических процессов. Показания и противопоказания к назначению витамина В1
  14. Витамин Р (цитрин, витамин проницаемости)
  15. Витамин В12- дефицитные анемии Метаболизм витамина В12
  16. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ. ТАБЛИЦА 4. ТЕСТ-ОРГАНИЗМЫ И УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ АНТИБИОТИКОВ
  17. Текущие изменения морфологического и биохимического состава крови. Референтные величины (показатели нормы) морфологического и биохимического состава крови (табл. 7.5—7.12)