<<
>>

ДИАГНОСТИКА АЛЛЕРГИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ. Специфическая диагностика

Диагностические аллергены

Диагноз аллергического заболевания устанавливается на основании аллергологического анамнеза, клинических проявлений, тестирования с предполагаемым аллергеном.

Аллергены как диагностические препараты применяются при условии соблюдения общепринятой стандартизации и сертификации, при наличии разрешения к их использованию Фармакологического комитета Соответствующие этим требованиям пыль- цовые аллергены производятся Ставропольским институтом вакцин и сывороток, бытовые и пищевые аллергены — Центральным НИИ вакцин и сывороток (г. Москва), грибковые и бактериальные — Казанским НИИ эпидемиологии и микробиологии.

Главным структурным подразделением, в котором проводится комплексная диагностика аллергических заболеваний, является аллергологический кабинет, где работает врач-аллерголог, имеющий сертификат, разрешающий осуществлять аллергологическое тестирование с учетом показаний и противопоказаний для каждого больного.

Перед аллергологическим тестированием пациент проходит осмотр и получает заключение о состоянии здоровья у оториноларинголога и по показаниям у невропатолога, окулиста, дерматолога, женщины также у гинеколога; кроме того, проводятся рентгенологическое обследование органов дыхания и придаточных пазух носа, клинический анализ крови и мочи, ЭКГ.

Общепринятым методом специфической диагностики неинфекционной аллергии являются кожные пробы (скарификацион- ные, внутрикожные) и провокационные аллергологические тесты. Противопоказания к их проведению:

—обострение аллергического заболевания;

—острый инфекционный процесс (ангина, грипп, ОРИ);

— обострение общесоматического заболевания;

—туберкулезный процесс любой локализации в периоде обострения;

— беременность;

— декомпенсированные (или субкомпенсированные) болезни сердечно-сосудистой системы, печени и почек, крови;

— психические заболевания в периоде обострения;

—длительная терапия глюкокортикоидами.

Тестирование также не проводится на фоне приема антигис-

таминных препаратов и после 60 лет.

Специфическая диагностика при сенсибилизации к пыльцо- вым аллергенам осуществляется за 3—4 месяца до начала цветения растений, к бытовым аллергенам—лучше в летний период, к эпидермальным — после устранения контакта с животными, т.е. в периоды наименьшего контакта с сенсибилизатором.

Кожные пробы

Скарификационные кожные пробы. Для скарификационных проб используются аллергены, содержащие 10 000 PNU. Одновременно можно поставить до 10 кожных проб с различными аллергенами. Проба проводится на волярной поверхности предплечья по средней линии после предварительной обработки кожных покровов 70 % раствором спирта. Насечки на поверхность кожи наносят на расстоянии 5 см (в строгом соответствии с маркировкой) стерильными скарификаторами, отдельными для каждого маркера (нижний с 0,01 % свежеприготовленным раствором гистамина, отступив на 5 см от линии лучезапястного сустава). С помощью положительной пробы с гистамином оценивается нормальная реактивность кожных покровов. На S см выше проводится тест с контрольной жидкостью (контроль отрицательной реакции). Аллергены наносятся в соответствии с маркировкой на расстоянии 5 см. Капли испытуемых растворов наносят на кожу и в капле стерильными скарификаторами, отдельными для каждого аллергена, делают две параллельные царапины длиной до 5 мм. Реакцию немедленного типа определяют через 20 мин (табл. 2).

Табл. 2. Оценка скарификационных аллергических проб

Отрицательная - Размеры такие, как в кон

троле

Сомнительная ± Гиперемия без волдыря

в месте скарификации

Продолжение табл.
2
Реакция Условные

обозначения

Характеристика реакции
Слабоположительная + Волдырь 2—3 мм заметен только при натягивании гиперемированной кожи
Положительная средней степени ++ Волдырь не более S мм отчетливо виден без натягивания кожи, окружен гиперемией
Резкоположительная +++ Волдырь в диаметре не более 10 мм с гиперемией кожи и псевдоподиями
Очень резкоположительная ++++ Волдырь более 10 мм в диаметре с гиперемией кожи и псевдоподиями

Проба уколом (prick-test) —удобный и весьма чувствительный метод определения сенсибилизации. При ее проведении используется стандартный набор разового применения, позволяющий сделать укол кожи иглой с ограничителем на глубину 1 мм. Проба уколом осуществляется через каплю испытуемого аллергена, каплю растворителя (для аллергена) и каплю 0,1% раствора гистамина. Расстояние между каплями не менее 2—4 см. Максимальная реакция на гистамин считывается через 10 мин, на пыль- цовые аллергены — через 1S мин. Реакцию оценивают так же, как и результат скарификационных проб.

Внутрикожные пробы. Проводятся при положительном аллергологическом анамнезе, указании на предполагаемую сенсибилизацию в случае отрицательных или сомнительных результатов скарификационной пробы.

Места проведения внутрикожной пробы, способы подготовки и условия выполнения такие же, как скарификационной пробы. Первоначальное разведение аллергена —1:10 000 (1PNU), и лишь при отрицательном результате с последним разведением ономожегбытъ 1:1000 (10 PNU), 1:100(100 PNU), 1:10(1000 PNU).

В нижнюю треть волярной поверхности предплечья на расстоянии 5 см от лучезапястного сустава вводят тест-контрольную жидкость в количестве 0,02 мл, затем отдельными стерильными шприцами туберкулинового типа вводят каждый аллерген в объеме 0,02 мл на расстоянии 5 см один от другого. Результаты реакции немедленного типа регистрируют через 20 мин (табл. 3).

Табл. 3. Оценка внутрикожных аллергических проб
Реакция Условные

обозначения

Характеристика реакции
Отрицательная - Размеры такие, как в кон-
Сомнительная ± троле

Волдырь рассасывается мед-

Слабоположительная + леннее, чем в контроле Волдырь диаметром 4—8 мм,
Положительная ++ кожа вокруг гиперемирована Волдырь 8—15 мм в диамет-
средней степени ре, кожа вокруг гиперемирована
Резкоположительная +++ Волдырь 15—20 мм в диаметре с псевдоподиями, кожа
Очень резкоположи- ++++ вокруг гиперемирована Волдырь более 20 мм в диа-
тельная метре с псевдоподиями, до-
черними волдырями по периферии с яркой гиперемией
кожи

Провокационные аллергические тесты

В отдельных случаях при проведении кожных проб реакция может быть ложноположительной из-за крайне высокой чувствительности капилляров кожи к механическому раздражению или к консерванту (фенолу).

В связи с этим прибегают к высокоспецифичным провокационным аллергическим тестам — назальному капельному или ингаляционному.

Следует помнить, что при проведении провокационных тестов возможны анафилактоидные реакции, которые требуют своевременной неотложной квалифицированной помощи. Поэтому в аллергологическом кабинете, стационаре, где подобное тестирование проводится, должен быть противошоковый набор. Однако при квалифицированном проведении аллергологического тестирования и правильной оценке полученных результатов на всех этапах подобных осложнений удается избежать.

Назальный капельный тест. Может использоваться при сезонном рините в случаях сенсибилизации к пыльце растений, при круглогодичном рините с подозрением на аллергию к бытовой пыли. Проводят в период ремиссии.

Вначале в одну половину носа пипеткой капают 3 капли тест- контрольной жидкости. Если в течение 15 мин отсутствует реакция со с гороны слизистой оболочки носа, можно приступить к назальному провокационному тесту с предполагаемым аллергеном. Тест проводят с аллергеном в концентрации, при которой была получена сомнительная реакция в ответ на внутрикожное тестирование, объем аллергена — 3 капли. Если через 10—15 мин получена отрицательная реакция, концентрацию аллергена увеличивают. Тест считается положительным, если после закапывания аллергена в полость носа появляется заложенность носа, ринорея, чиханье.

Провокационная ингаляционная проба проводится в фазе ремиссии заболевания в условиях стационара, чаще при отрицательных результатах скарификационных тестов с аллергенами в диагностике профессиональной бронхиальной астмы.

При испытании небактериальных аллергенов животного или растительного происхождения, содержащих 10 000 PNU, готовят разведения 1:2,1:4,1:8 и т.д. (чаще до 2048), при использовании химических аллергенов применяют специально подобранные концентрации аллергенов, исключающие неспецифические реакции, связанные с запахом вещества или раздражающим действием. Так, по данным В.Н.

Ожигановой, М.З. Нариманова, концентрация используемых для ингаляционных провокационных проб бихромата калия составляет 0,01—0,001 %, формальдегида —0,05—0,01 %, хлористого никеля—0,01—0,001 %, азотистого кобальта—0,5—0,005 %, урсола—0,001—0,0001 %.

Вначале проба проводится с тест-жидкостью—дистиллированной водой в течение 3 мин. При отрицательном результате приступают к провокационной пробе с испытуемым аллергеном в течение 3 мин (время проведения пробы может быть сокращено при положительных результатах). Проба считается положительной при изменении аускультативной картины—удлинении выдоха, появлении сухих свистящих хрипов на выдохе, снижении ЖЕЛ на 10 %, ФОБ, — на 15—20 %.

Ингаляционная провокационная проба может сочетаться с лабораторными методами аллергодиагностики. По нашим данным, проведение до ингаляционной и через 24 ч после ингаляционной провокационной пробы исследования с помощью имму- ноферментного анализа IgE или теста деструкции тучных клеток с тем же профессиональным аллергеном имеет важное практическое значение. Увеличение уровня IgE и процента дегрануляции тучных клеток через 24 ч после ингаляционной провокационной пробы в значительной мере повышает достоверность полученных положительных результатов.

Лабораторные методы специфической аллергодиагностики

Эти методы могут широко использоваться при аллергических заболеваниях в фазе обострения, в периоды массивного контакта с аллергеном, при высокой чувствительности заболевших к

аллергену, при наличии противопоказаний, у детей, при иденти- - фикации профессиональных аллергических заболеваний, так как исключают возможность появления неспецифических, ложноаллергических реакций.

.Среди различных способов специфической аллергодиагностики при реагиновом IgE-зависимом типе более предпочтительно определение моноклональных IgE. Существуют непрямые методы определения IgE и наиболее распространенные прямые методы выявления специфических IgE, основанные на новых технологиях и использовании диагностикумов в виде стандартизованных и сертифицированных аллергенов к ним.

Реакция пассивного переноса по Праустнитцу—Кюстнеру (непрямой метод постановки кожной пробы) чаще используется в детской практике при идентификации пищевой аллергии. Сущность метода заключается в реакции пассивного переноса реципиенту сенсибилизации с помощью внутрикожного введения 0,1 мл сыворотки крови больного с наличием в ней предполагаемых специфических IgE. Спустя 24 ч в этот же участок вводят 0,02 мл предполагаемого аллергена. Реакцию регистрируют через 20 мин. Однако угроза переноса СПИДа, вирусного гепатита и других инфекций не позволяет широко использовать данный метод.

Определение специфических IgE. Исследование общего IgE осуществляется с помощью бумажного радиоиммуносорбент- ного теста (метод PRJST), определение аллергоспецифического IgE — радиоаллергосорбентного теста (метод RAST). Наряду с ними в настоящее время для определения аллергоспецифических IgE все шире используется способ иммуноферментного анализа (ИФА).

Метод RAST наиболее специфичен и точен, так как основан на использовании радиоактивной метки. Сущность его заключается в связи специфического IgE исследуемой сыворотки с аллергеном, размещенным на бумажной пластинке. После отмывания неспецифического (общего) IgE в содержимое добавляются меченые 1251 антитела против IgE. Образовавшийся радиоактивный комплекс считывается на сцинтилляционном счетчике.

Метод ИФА. Сыворотка обследуемого, содержащая специфические IgE, наслаивается на полистирольную поверхность микропланшет с адсорбированным набором аллергенов, с которыми связываются только определенные специфические IgE.

При точечном иммуноанализе аллергены наносятся в виде точек на нитроцеллюлозные диски.

Для определения концентрации специфических IgE, связанных с аллергеном, добавляются антиантитела (меченные ферментом) к IgE. На следующем этапе с помощью специальных реагентов, воспроизводящих цветную реакцию, интенсивность

которой зависит от концентрации специфических IgE в комплексе с аллергеном, определяют содержание специфических IgE фотометрически в вертикальном луче в системе «Унискан» или «Мультискан». В норме она не превышает 210 МЕ/ед.

Наряду с выявлением специфических IgE используются и другие лабораторные тесты для диагностики как антителозависимых реакций (определение показателей специфического повреждения базофилов, аллергических антител в реакции пассивной ге- магглютинации, реакция связывания комплемента и др.), так и реакций замедленного (клеточного) типа (реакция торможения миграции лейкоцитов крови—РТМЛ, тест розеткообразующих клеток—РОК, тест повреждения нейтрофилов и др.).

Их применение в аллергологической практике не потеряло своего значения—идентификация повышенной чувствительности к аллергенам, аутоантигенам позволяет осуществлять более целенаправленное лечение и реабилитацию больных.

Реакция прямого специфического повреждения базофилов крови. Базофилы крови, тучные клетки—клетки-мишени в реализации аллергических реакций немедленного типа. IgE с помощью Fc-фрагмента фиксируются на рецепторах мембран этих клеток, а с помощью Fab-фрагмента специфически реагируют с аллергеном. Это сопровождается резкой активацией (дегрануляцией) клеток-мишеней, что и используется в качестве маркера аллергической реакции.

Для постановки реакции 5 мл исследуемой крови добавляют в центрифужную пробирку с 5 каплями 6 % водного раствора трилона Б и инкубируют в течение часа при 37 °С. Образовавшуюся взвесь лейкоцитов с помощью пастеровской пипетки переносят в чистую пробирку, а затем разливают в две центрифужные пробирки по 0,3 мл. В первую пробирку (опытную) добавляют 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в котором растворена рабочая доза аллергена, во вторую (контрольную)— 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия без аллергена. Обе пробирки инкубируют в течение 10 мин при 37 °С, затем центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. После чего сливают надосадочную жидкость, а лейкоцитарную массу, оставшуюся на дне пробирки, осторожно встряхивая, разбивают в остатке жидкости, стекающей со стенок. С помощью пастеровской пипетки содержимое каждой пробирки переносят на отдельные предметные стекла (в виде капли на край) и шлифованным краем другого стекла готовят тонкие лейкоцитарные мазки. Мазки окрашивают эозин-метиленовым синим по Май—Грюнваль- ду в течение 1—2 мин после просушивания на воздухе. После промывания препарата в метиловом спирте мазки-препараты микроскопируют с иммерсией (увеличение 10 х 80). Просчиты-

вают 50 базофилов по краям мазка и число поврежденных средних клеток. Показатель поврежденных клеток в опытном и контрольных препаратах определяют по формуле:

Процент поврежденных базофилов в опьгге Показатель РСПБ .

Процент поврежденных базофилов в контроле

Реакция считается положительной при показателе 1,4 и выше.

Л.А. Дуева с соавт. (1986) подобрали рабочие концентрации и дозы химических аллергенов и антибиотиков для реакции прямого специфического повреждения базофилов крови (табл. 4).

Табл. 4. Рабочие концентрации и дозы реагентов для РСПБ border=0>
Аллерген Концентрация раствора аллергена (%) Рабочая доза (мкг) в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия на 0,3 мл крови
Кобальт хлористый 0,05 5,0
Марганец хлористый 0,05 5,0
Никель хлористый 0,01 1,0
Формальдегид 0,005 0,5
Хром хлорный 0,05 5,0
Эпихлоргидрин 0,05 5,0
Пенициллин и полусин- тетические пенициллины 100 ЕД 10,0

Тест деструкции тучных клеток. Для получения взвеси тучных клеток вводят внутрибрюшинно крысе 8—10 мл (мыши — 2—5 мл) подогретого до 37 °С изотонического раствора хлористого натрия, приготовленного на 0,15 моль фосфатном буфере с pH 7,2, слегка массируют живот. Суспензию тучных клеток отмывают изотоническим раствором хлористого натрия, затем центрифугируют при 500 об/мин.

Суспензию тучных клеток (0,02 мл) и сыворотку больного (0,02 мл) инкубируют 15 мин при 37 °С, затем вносят 0,02 мл аллергена в предварительно подобранной концентрации и снова инкубируют 15 мин при 37 °С. Одномоментно готовят три контроля: тучные клетки без сыворотки и без аллергена; тучные клетки с сывороткой без аллергена; тучные клетки с аллергеном без сыворотки.

После окраски образцов 0,025 % раствором толуидинового синего или 0,3 % раствором нейтральной краски заполняют суспензией тучных клеток камеры Горяева и подсчитывают окрашенные клетки, сравнивая число гранулированных клеток в контроле и опыте. Наблюдаемая дегрануляция тучных клеток в ис-

пытуемом образце считается слабоположительной при наличии 10—20 % дегрануляции, положительной — при 21—40 %, резкоположительной —при дегрануляции более 40 % клеток по сравнению с контролем. Концентрация аллергенов, не вызывающая спонтанной дегрануляции, для антибиотиков—100—1000 ЕД/мл, калия бихромата и йодида, натрия хромата, никеля сульфата— 0,01—0,1 % раствора, формальдегида—0,2—0,4 %. Бытовые аллергены используются в дозе от 10 до 100 PNU.

Реакция пассивной гемагтлютинации (РПГА) позволяет обнаруживать антитела к водорастворимым и водонерастворимым аллергенам.

Реакция основана на феномене агглютинации эритроцитов, сенсибилизированных in vitro к химическим аллергенам, при добавлении сыворотки пациента, содержащей антигаптенные антитела.

Реакция торможения миграции лейкоцитов крови (РТМЛ)

основана на способности сенсибилизированных Т-лимфоцитов (например, к гаптенам) выделять лимфокин—фактор, ингибирующий миграцию лейкоцитов. С помощью РТМЛ раскрывается реакция клеточного типа (неантителозависимая) к различным антигенам.

<< | >>
Источник: Скепьян Н.А.. Аллергические болезни: дифференциальный диагноз, лечение. — Мн.: Беларусь, 2000. — 286 с.: ил.. 2000

Еще по теме ДИАГНОСТИКА АЛЛЕРГИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ. Специфическая диагностика:

  1. ДИАГНОСТИКА И КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ КРОВООБРАЩЕНИЯ У ПОСТРАДАВШИХ С ТРАВМАТИЧЕСКИМ ШОКОМ. ДИАГНОСТИКА
  2. РЕФЕРАТ. БОЛЕЗНИ ПАРОДОНТА, ДИАГНОСТИКА, ДИАГНОЗ2000, 2000
  3. ІІ. Лучевая диагностика поражения почек при болезни Ходжкина
  4. IV. Лучевая диагностика поражения скелета при болезни Ходжкина
  5. Диагностика туберкулёза. Применение иммунологических методов для решения клинических задач диагностики туберкулёза.
  6. ДИАГНОСТИКА И КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА НАРУШЕНИЙ СВЕРТЫВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ КРОВИ
  7. І. Комплексная лучевая диагностика поражения органов грудной полости при болезни Ходжкин
  8. V. Лучевая диагностика поражения центральной нервной системы при болезни Ходжкина
  9. ІІІ. Лучевая диагностика поражения печени, селезёнки и поджелудочной железы при болезни Ходжкина
  10. 2.6. ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗАРТРИИ. 2.6.1. Дифференциальная диагностика по локально-диагностическим признакам
  11. КОЛОМИЕЦ С.Н.. АЗБУКА ЭХОКАРДИОГРАФИИ. Краткое пособие по ультразвуковой диагностике для студентов, семейных врачей и кардиологов (сигнальный экземпляр). ОДЕССКИЙ ГОСМЕДУНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ПРОПЕДЕВТИКИ ВНУТРЕННИХ БОЛЕЗНЕЙ. ОДЕССА . 2010, 2010
  12. Аллергические болезни: дифференциальный диагноз, лечение.
  13. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ
  14. Диагностика