<<
>>

§ 5. Количественное определение

Большинство методов количественного определения антраценпроизводных предусматривает определение суммы свободных оксиантрахинонов после предварительного гидролиза антрагликозидов,

В настоящее время наиболее широко применяется колориметрический метод, предложенный Аутергофом, в различных модификациях.

Метод принят ГФ х для определения антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье. Метод ГФ X с некоторыми изменениями (в целях безопасности работы этиловый эфир заменен хлороформом) приводится ниже.

Методика количественного определения суммы антраценпроиэ- водных (свободных и связанных в виде гликозидов). 0,05 г (точная навеска) порошка исследуемого сырья помещают в круглодонную

колбу с нормальным шлифом вместимостью 100 мл, соединяют с обратным холодильником и подвергают гидролизу путем кипячения в течение 15 мин с 7,5 мл ледяной уксусной кислоты (при исследовании коры крушины ольховидной, корня ревеня) или с 7,5 мл ледяной уксусной кислоты и 1 мл концентрированной НС1 (при исследовании листьев сенны, корневища и корня марены).

Во время нагревания колбу слегка покачивают, чтобы не допустить пригорання растительного материала. После остывания в колбу, не снимая холодильника, прибавляют 30 мл хлороформа и кипятят на водяной бане в течение 15 мин для экстрагирования свободных антраценпроизводных. После остывания (колбу вместе с холодильником снять с водяной бани) хлороформное извлечение фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 300 мл. Колбу дважды ополаскивают хлороформом (по 10 мл) и, пропуская через эту же вату, выливают в делительную воронку; вату дважды промывают хлороформом (по 5 мл).

К хлороформному извлечению в делительной воронке прибавляют 40 мл воды и, слегка покачивая воронку, добиваются перемешивания слоев жидкости, чтобы отмыть избыток кислоты.

После полного расслоения нижний, хлороформный, слой сливают в коническую колбу вместимостью 2о0 мл, а водный слой отбрасывают. Из колбы хлороформное извлечение вновь переносят в делитель- /’со? В0РО!1КУ 11 приливают туда щелочно-аммиачного раствора {5 /о-ного NaOH, содержащего 2%-ный аммиак), предварительно ополоснув им колбу. Покачивая делительную воронку в виде «8» добиваются тщательного перемешивания слоев жидкости, чтобы извлечь антраценнроизводные щелочно-аммиачным раствором из хлороформа* Через 5 мин делительную воронку оставляют в покое, и после паяного расслоения жидкости сливают нижний, хлороформный, слой в коническую колбу; красный или фиолетовый, прозрачный водно-щелочной слой сливают в мерную колбу вместимостью 250 мл. Хлороформный слой вновь переносят в делительную воронку, приливают туда 20 мл щел очно-аммиачного раствора, предварительно ополоснув им колбу, и вновь извлекают антрацен производные, 'Как описано выше, до тех пор, пока водно-щелочной слой перестанет окрашиваться.

Собранные водно-щелочные извлечения доводят в мерной колбе до метки щелочно-аммиачным раствором и перемешивают. 25 мл полученного окрашенного раствора помещают в круглодонную колбу с нормальным шлифом, соединяют с обратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После остывания измеряют оптическую плотность раствора на фотшлектро- колориметре с зеленым светофильтром (X = 525 нм) в кювете ТОЛЩИНОЙ слоя 10 мм (нулевую точку устанавливают п0 дистиллиро- ванной воде). При получении слишком интенсивной окраски рас- твор перед колориметри ров а нием разбавляют щелочно-аммиачным раствором.

Концентрацию антраценпроизводных в колориметрическом растворе, выраженную в истизине, определяют по калибровочному

графику, построенному по хлориду кобальта (СЬСЬ-бНоО). Для этого готовят от 0,2 до 3,0%-ные растворы хлорида кобальта (Ш—

12 растворов равномерно возрастающей концентрации) и измеряют их оптическую плотность на этом же фотоэлектроколориметре (калибровочный график студенты получают готовым).

По оси ординат откладывают значение оптической плотности, а оси абсцисс концентрацию антрацен производных в миллиграммах на ИЗО мл, исходя из того, что 1 %-ный хлорид кобальта по оптической плотности соответствует 0,36 мг истизина в 100 мл щелочно-аммиачного раствора. Приготовление эталонных растворов и определение их оптической плотности производят не менее 3 раз.

Процентное содержание антраценпроизводных в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

aVK

Х= тЮ 000-К.') ’

где а — концентрация антр а не н пр о и з в оді іьі х в мг на 100 мл, найденная по калибровочному графику; V — первоначальный объем щелочного извлечения, мл; т—масса навески сырья, г, ю потеря в массе сырья при высушивании, %; К — коэффициент разбавления раствора перед колориметрированием.

Методика количественного определения антрагликтидов. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 150 мл, приливают 100 мл воды, перемешивают 10 мин и нагревают с обратным холодильником в кипящей водяной бане в течение 15 мин при периодическом перемешивании (покачивании). После охлаждения под струей воды смесь перемешивают, дают отстояться 10 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр. 25 мл полученного извлечения помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 2,5 мл 50%-ной HaS04 и нагревают в кипящей водяной бане при периодическом перемешивании в течение 30’мин После охлаждения раствор переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл, а колбу ополаскивают 10 мл воды и 60 мл хлороформа. Промывные воды и хлороформ присоединяют к основному извлечению в делительной воронке и взбалтывают в течение 5 мин. После отстаивания хлороформный слой отделяют, а извлечение взбалтывают с новой порцией (30 мл) хлороформа. К объединенному хлороформному извлечению прибавляют 50 мл щелочи о-аммиачного раствора и осторожно взбалтывают в течение 5 мин. После отстаивания прозрачный водный слой сливают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают.

25 мл полученного раствора помещают в коническую колбу с обратным холодильником и нагревают в кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения жидкость количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем щелочно-аммиачным раствором до метки.

Оптическую плотность раствора измеряют с помощью спектрофотометра при Я = 525 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор.

Концентрацию производных антрацена в растворе, выраженную в хризофановой кислоте, определяют по калибровочному графику, построенному по растворам хлорида кобальта. Процентное содержание аитраценпроизводных (в пересчете па антрагликозиды) X вычисляют по формуле

__ «100- 10(Ь 50- 100 ■ 10Q. 1,59 _ «8-1,59

1000-1000^25-25 {100-ш) = m (100-е) ’

где а ^ концентрация аитраценпроизводных испытуемого раство- ра, найденная по калибровочному графику, мг/л; т —- масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %; 1,59 — отношение средней массы антрагликозидов к средней массе агликонов.

Для определения отдельных соединений аитраценпроизводных пользуются хроматоспектрофотометрическими методами. Из растительного материала антраценпронзводные экстрагируют в виде гликозидов или свободных агликонов и разделяют с помощью хроматографии на бумаге или в тонком слое силикагеля. Для разделения аитраценпроизводных, извлекаемых метиловым спиртом (антрагликозиды и свободные агликоны), предложен метод тонкослойной хроматографии на силикагеле марки КСК в системе растворителей бензол — метиловый спирт (4 : 1), Пятна антраиенпроиз- водных на хроматограмме отмечают в УФ свете и собирают каждое пятно на стеклянный фильтр № 4. Фильтр промывают 0,5 н. NaOH, количественно переносят в мерные колбы емкостью 50’мл и доводят объем до метки 0,5 н, NaOH, Через 20 мин определяют оптическую плотность растворов по максимуму поглощения в УФ области.

Реактивы и оборудование: хлороформ; толуол; метиловый спирт (метанол); этиловый спирт (этанол); эти л ацетат; бензол; муравьиная кис- лота; Уксусная зелота (лед ); НС1 (конЦ.

и 10%-пая); H2S04 (50%-ная); NaOH (0,0 н. и ш/о-ный); NaOH (5%-ный в этиловом спирте); аммиак (10%-ныЙ)' щелочно-аммиачный раствор (NaOH 5%-ный, содержащий 2%-ный аммиак}' кобальта хлорид; магния ацетат (1%-ный раствор в этиловом спирте).

Пластинки «Силуфол».

Хроматографическая бумага «С»; фотоэлектроколориметр; спектрофотометр' УФ лампа; колбы конические вместимостью 50, 100, 250 мл; колбы круглодонныё шлифом вместимостью 50, 100 мл; колбы мерные вместимостью гь, ЬО 100, 250 мл; воронки делительные вместимостью 100, 250, 300 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; камеры хроматографические для ТСХ; камеры хроматографические для БХ; пробирки стеклянные; штативы для делительных воронок; фильтры стеклянные № 4; воровки стеклянные для фильтрования .диаметром 5 см; штативы лабораторные; плитки электрические; бани водяные лабораторные; весы лабораторные аналитические.

<< | >>
Источник: Коллектив авторов. Химический анализ лекарственных растений: Учеб, пособие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафро- нич Л. Н., Отряшенкова В, Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. И., Сафронич Л. Н.■— М.: Высш. школа, 1983,— 176 с., ил.. 1983

Еще по теме § 5. Количественное определение:

  1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ. ТАБЛИЦА 4. ТЕСТ-ОРГАНИЗМЫ И УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ АНТИБИОТИКОВ
  2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
  3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ВСАСЫВАНИЯ ЛЕКАРСТВ
  4. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ПРОЧНОСТИ СВЯЗЫВАНИЯ
  5. 9.3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ЭЛИМИНАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
  6. Количественные и качественные дефекты фагоцитов
  7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТОКСИЛЬНЫХ ГРУПП
  9. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
  10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ pH
  11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  12. Г. Определение точки кипения