<<
>>

§ 5. Количественное определение

В последние годы все большее распространение получают различные физико-химические методы анализа, которые имеют ряд существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметрическими и титрометрическими методами, а именно быстрота и точность определения, обнаружение даже незначительных количеств и, что особенно важно, возможность выделения отдельных флаво нондов из растительного сырья. К таким методам относятся фотоэлектроколориметрия, спектрофотометрия, денситометрия с использованием хроматографии на бумаге и в тонком (закрепленном и незакрепленном) слое сорбента.

Хроматография используется как для очистки, так и разделения суммы флавоноидов на отдельные компоненты.

Особенно ценным считается хроматоденситометрический метод, сущность которого заключается в выделении и разделении флаво- ноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме. Метод имеет преимущества в быстроте проведения анализа и точности определения, так как в данном случае исключается стадия элюирования.

Фотоколориметрический метод основан на цветных реакциях флавоноидов с солями различных металлов (алюминия, циркония, титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции восстановления цинком или магнием в кислой среде. Известна цветная реакция флавоноидов с азотнокислым и уксуснокислым урацилом, позволяющая количественно определять рутин в смеси с киарцетшюм.

Учитывая проявление флавоноидными соединениями слабо выраженных кислотных свойств (что обусловлено наличием в молекуле фенольных гидроксилов), для анализа может быть применен метод кислотно-основного титрования в неводных растворителях: Лиметилформамиде, диметилсульфоксиде, а также ацетоне.

Сравнительно редко для количественного определения флавоноидов применяют полярографию и метод амперометрического титрования.

Методика количественного определения рутина в траве гречихи (ИегЬа Fagopyri). Рутин широко распространен в природе. Основ* ными источниками его получения являются бутоны софоры японской (Sophora japonica L. сем. бобовых — Fabaceae (Legimiіnosae)) и трава гречихи (Fagopyrum sagittatum Gilib, сем. гречишных — Polygonaceae). Определение содержания рутина в сырье проводят

спектрофотометрическим методом:

рутии-З-рутниоэид кверцетина


1 г (точная навеска) измельченной травы гречихи (размер частиц І мм) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 30 мл 95%-ного этилового спирта. Содержимое колбы взвешивают. Затем к колбе присоединяют обратный (шариковый) холодильник и проводят экстракцию па кипящей водяной бане в течение 1,5 ч. После этого колбу охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом. Этанольный экстракт фильтруют через бумажный фильтр. 20 мл полученного экстракта упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 5 мл этилового спирта, фильтруют через бумажный фильтр.

0,03—0,05 мл полученного экстракта наносят на линию старта стеклянной пластинки 9 X 15 см с закрепленным слоем силикагеля марки ЛС 5/40 (Чехословакия) в виде полос — три полосы исследуемого раствора и одну полосу «свидетеля». Пластинку сушат на воздухе в течение 10 мин и хроматографируют в.системе н-бутанол— ледяная уксусная кислота — вода (4:1:2).

После того как фронт растворителя пройдет 11—12 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе до исчезновения запаха растворителей. В УФ свете отмечают пятна рутина, флуоресцирующие темно-коричневым светом (Rf са 0,68). Отмеченные зоны силикагеля с рутином и зону холостого опыта количественно переносят в колбы вместимостью 25 мл и элюируют 10 мл смеси диоксан — вода 1 : 1 при встряхивании в течение I ч. Раствор фильтруют через бумажный фильтр.

Оптическую плотность полученных элюатов измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной СЛОЯ 1 СМ При длине волны 363 нм на фоне элюата холостого опыта.

Процентное содержание рутина в сырье в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

х= КтУїУяРцъз ЮР_____

= УаоГІ,«чіоо—®) *°,667г’

где Кі — коэффициент элюирования (1,195); Ух — объем эта ноль- ного экстракта после растворения сухого остатка, мл; V» — объем



этамолиного экстракта, взятый для нанесения на хроматограмму, мл; V'3 — объем элюата; £>3в3—оптическая плотность раствора при X = 363 нм; £>[% —удельный показатель поглощения рутина при X — 363 нм (268,4); т — масса навески сырья, г; да — потеря в массе сырья при высушивании, %; 0,667 — коэффициент пересчета на 20 мл экстракта; I—толщина слоя, см.

Реактивы и оборудование: этиловый спирт (этанол); бутиловый спирт («-бутанол); уксусная кислота (лед.); диоксан; силикагель марки ЛС 5/40; рутин.

Бумага фильтровальная; колбы круглодонные с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; колбы мерные вместимостью 20 мл; колбы плоскодонные вместимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пластинки стеклянные для ТСХ размером 9 X 15 см; фильтры стеклянные № 4; пипетки измерительные вместимостью 1 мл; бюксы с притертыми крышками; сита с диаметром отверстий 1 мм; весы ручные; весы лабораторные аналитические; шкаф сушильный лабораторный; эксикатор; спектрофотометр СФ-4А.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в соцветиях пижмы обыкновенной (Flores Т ап асе И). 1 г (точная навеска) измельченных соцветий пижмы помещают в пакетик из фильтровальной бумаги и экстрагируют в аппарате Сокслета (вместимостью 100 мл) хлороформом в течение 3 ч. Хлороформное извлечение отбрасывают, а пакетик с навеской высушивают и экстрагируют в круглодонной колбе с обратным холодильником на водяной бане 30 мл метилового спирта в течение 3 ч, периодически перемешивая. Гк'рут 20 мл извлечения и метиловый спирт ОТГОНЯЮТ досуха. Сухой остаток растворяют в 20 мл дистиллированной воды, количественно переносят в делительную воронку вместимостью S0 мл и очищают дважды по 15 мл четыреххлористым углеродом.

Очищенный водный экстракт пятикратно обрабатывают 20 мл этил ацетата, дожидаясь каждый раз полного расслаивания фаз. Объединенный этилацетатный экстракт упаривают в вакууме досуха и сушат остаток в течение 1 ч в сушильном шкафу при і = 65 °С. Высушенный остаток растворяют в небольшом объеме этилового спирта и переносят количественно в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем до метки этиловым спиртом (раствор А), 0,5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем Доводят этиловым спиртом до метки (раствор Б).

Определяют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при X = 330 нм.

Процентное содержание суммы флавоноидов х вычисляют по формуле

2ЫЖ100

E\Km(W-w)t ’

где D— оптическая плотность испытуемого раствора; 25 — объем раствора А, мл; К — коэффициент разведения раствора А, равный 100; £}% — удельный показатель поглощения, равный 560,8; m — навеска сырья в расчете на взятый аликвот, г; да — потеря в массе сырья при высушивании, %; I — толщина слоя, см.

Реактивы и оборудование; ітн.'ііінмі'і спирт (чтинол); метиловый спирт (метанол); хлороформ; четырех хлор псі і.гіі углерод; чтил ацетат; вода дистил.

Бумага фильтровальная; аппарат Сокслета; колбы іиКісішдои иые вместимостью 200 мл; колбы кругдодонные с нормалышм шлифом нмеетнмосгыо 100 мл; колбы мерные вместимостью 25 и 50 мл; пипетки птмеріпч'ЛМіїріи вместимостью 1 и 20 мл; цилиндры мерные на 50 и 100 мл; воровки Дел Шел иные вместимостью 50 мл; бюксы с притертыми крышками; весы ручные, неси лабораторные аналитические; эксикатор; установка для отгонки раствор in еле||; шкаф сушильный лабораторный; спектрофотометр СФ-4А.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве леспедецы копеечниковой (НегЬа Lcspvdezac Iwdi/xiroidc;), В основу разработанного метода количественного определении суммы флаво- ноидов в надземной части леспедецы комеечнпковоп (Lcspedeza hedysazoides сем. бобовых — Fabaceae (LepuiiiiiKwae)) положено выделение суммы флавоноидов и определение оптической плотности раствора в этиловом спирте при длинноволновом максимуме поглощения (353 нм) с последующим расчетом процентного содержания по удельному показателю поглощении чистого гомоориентинаї

(лютсолии-С-С-р-О-глюкопираиозил)


Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья (размер частиц

1— 2 мм) экстрагируют этиловым спиртом в аппарате Сокслета в течение 4 ч, Извлечение упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 10 мл горячего 10%-ного NaCl, раствор охлаждают, фильтруют через вату в колонку полиамидного сорбента (диаметр колонки 2,5 см, количество полиамида 1,5 г). Колбу повторно промывают 5 мл 10%-иого NaCl и раствор фильтруют в колонку с полиамидом .

Сумма флавоноидов адсорбируется в верхнем слое полиамида. Колонку с полиамидом промывают 30 мл воды. Элюирование суммы флавоноидов с сорбента проводят 50 мл этилового спирта. Когда зона флавоноидов подходит к нижней части сорбента (в УФ свете характерное свечение), раствор собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Раствор доводят спиртом до метки и тщательно перемешивают (раствор А). 1 м раствора А переносит и мерную колбу вместимостью 50 мл и объем доводят до метки ЭТИЛОВЫМ спиртом. Полученный раствор после тщательного перемно\/\/Ч

НСК^/Ч0/\0

уибеллиферон эскулетин

В [,ас1ении «“=а«ва.

жении киптаписи, бергаптен, изіпиіпинмлйн ида.):

/у\

nAa,

кумарин

'V'VVi

днгидрокумарии

»\/\

,1 і

НСХЧ/^о^О

псорнлси



Псорален выделен из плодов и корней псорален Постниковой и дру- гих видов сем* бобовых: ксантотоксин, бергаптен, изопимпиїтеллин выделены из плодов амми большой и пастернака посевного сем* сельдерейных (зонтичных); пеуцеданин — из корней горичника Мо- риссона и других видов сем. сельдерейных (зонтичных);


б) производные ангелицина, т. е. фурокумнрина, фурановое ядро которого сконденсировано с кумарином в 7,8-положении (ан- гелицин, атамантин и др.):

он

°у °sJ\yOH

I

но/Ч/чо/'Чо

сін

эллаго&ая кислота

Эллаговая кислота обнаружена в растениях сем. сумахових, розоцветных и др.

б. Кумарины, содержащие систему бензофурана, сконденсированную с кумарином в 3,4-положеииях:

л. уОН

Куместролы выделены па различных видов клевера сем, бобовых.

7< Некоторые другие более сложные соединения, в состав которых входит кумариновая система,

<< | >>
Источник: Коллектив авторов. Химический анализ лекарственных растений: Учеб, пособие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафро- нич Л. Н., Отряшенкова В, Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. И., Сафронич Л. Н.■— М.: Высш. школа, 1983,— 176 с., ил.. 1983

Еще по теме § 5. Количественное определение:

  1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ. ТАБЛИЦА 4. ТЕСТ-ОРГАНИЗМЫ И УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ АНТИБИОТИКОВ
  2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
  3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ВСАСЫВАНИЯ ЛЕКАРСТВ
  4. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ПРОЧНОСТИ СВЯЗЫВАНИЯ
  5. 9.3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ЭЛИМИНАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
  6. Количественные и качественные дефекты фагоцитов
  7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТОКСИЛЬНЫХ ГРУПП
  9. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
  10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ pH
  11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  12. Г. Определение точки кипения
  13. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЯ ПРЕЛОМЛЕНИЯ
  14. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА
  15. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЙОДНОГО ЧИСЛА
  16. Глава 1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕРИОДА НОВОРОЖДЕННОЙ
  17. БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПГ