<<
>>

§ 5. Количественное определение

Существующие методы количественного определения стероидных алкалоидов можно разделить на следующие группы.

1. Титрометрические методы. Гликоалкалоиды хорошо отти- тровываются соляной кислотой с диметиловым желтым, а также потен ни о метр и чески с сурьмяным или стеклянным электродами.

Недостаток титрометрических методов — длительность промывания технических гликоалкалоидов от аммиака.

2. Методы бромирования. Гликоалкалоиды, имеющие двойную связь в положении 5, 6, могут количественно бромироваться пири- дипсульфатбромидом. Этот метод пригоден только для анализа препаратов соласодина, а не растительного сырья и полупродуктов его производства.

3. «Сахарные» методы. После проведения кислого гидролиза гликоалкалоидов и осаждения агликонов проводят титрование отщепившихся сахаров 0,1 н. перманганатом калия. Недостатком «сахарных» методов является то, что некоторые сахара могут выпадать в осадок вместе с «сырыми» гликоалкалоидами и, таким образом, завышать результаты анализа.

4. Гравиметрические методы. Эти методы разработаны в основном для препаративных целей й часто комбинируются с колоночной хроматографией. Если метод не комбинируется с предварительным разделением на колонке, то определяется сумма гликоалкалоидов или их агликонов. Схема метода сводится к следующему: гликоал- калоиды экстрагируют из растительного сырья разбавленным раствором H3S04 с последующим осаждением их раствором аммиака. Полученный осадок гликоалкалондов обрабатывают кипящим этиловым спиртом и гидролизуют разбавленным раствором НС1 при кипячении. После подщелачивания агликоны исчерпывающе экстрагируют бензолом. Растворитель отгоняют, остаток высушивают при 120 °С до постоянной массы и взвешивают.

5. Колориметрические методы. Хотя стероидные алкалоиды дают реакции окрашивания со многими альдегидами, для количественного определения применяется лишь реакция с формальдегидом в силыюкислой среде (малиново-красное окрашивание), так как окрашивание с другими альдегидами не подчиняется закону

Ламберта — Бера. 3

Методика количественного определения соласодина в трсж паслена дольчатого (Herba Solani laciniati) (ОСТ 64-4-118 74). Методика основана на осаждении гликоалкалоидов аммиаком из уксуснокислого извлечения с последующим потенциометрическим титрованием НС1.

30 Г (с ТОЧНОСТЬЮ ДО 0,01 г) измельченного сырья (СИТО . помещают в плоскодонную колбу вместимостью 1,0—1,5 л и заливают 600 мл 5%-ной уксусной кислоты. Колбу с содержимым помещают на нагретую водяную баню и поддерживают внутри колбы температуру 50—60 °С в течение 4 ч при периодическом помешивании. Во избежание испарения колбу закрывают корковой пробкой, в которую вставляют термометр. Затем уксуснокислое извлечение фильтруют через воронку Бюхнера или складчатый фильтр.

200 мл прозрачного фильтрата помещают в стеклянный стакан вместимостью 400 мл, прибавляют 60 мл 25%-ного раствора аммиака и нагревают на водяной бане до температуры внутри стакана 60— 65 С.

Охлаждают на льду в течение 2—3 ч и выпавшие технические гликоалкалоиды отфильтровывают с помощью воронки Бюхнера через двойной бумажный фильтр при слабом отсасывании или через складчатый фильтр. Остатки гликоалкалоидов из стакана количественно переносят на фильтр, смывая стакан маточником или 1 А-ным раствором аммиака, Жидкости с фильтра дают полностью стечь, после чего фильтр с гликоалкалоидами высушивают в сушильном шкафу при 80—90 °С (в развернутом виде на чашке Петри). Сухой фильтр с гликоалкалоидами помещают в колбу № 1 вместимостью 250 мл, приливают 100 мл этилового спирта п гликоалка- лонды экстрагируют при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течение 30—40 мин. Затем колбу снимают, эта- нолъньгй раствор, декантируя, фильтруют через воронку с ватным тампоном в колбу № 2 вместимостью 250 мл. Этиловый спирт отгоняют на водяной бане досуха. В колбу № 1 добавляют !™ЫЙ спирт примерно до 100 мл и вновь экстрагируют 30-^0 мин. Экстрагирование проводят 3-^ раза, собирая фильт- .раты в колбу № 2, и отгоняют каждый раз этиловый с пи пт досуха. v

Полноту извлечения гликоалкалоидов устанавливают с помощью раствора формальдегида в серной кислоте или паров иода.

После отгонки четвертой порции остатки этилового спирта выдувают воздухом (при нагревании на водяной бане, под тягой) К сухому остатку примешивают 5—10 мл 1 %-ной уксусной кислоты и растворяют гликоалкалоиды при слабом нагревании на водяной бане,

к уксуснокислому раствору гликоалкалоидов приливают 5— ^ ял* 25 у^-кого раствора аммиака и нагревают на водяной бане до 60 -65 С. Выпавшие гликоалкалоиды охлаждают в течение 1 ч на льду, жидкость с гликоалкалоидов фильтруют декантацией через складчатый фильтр, промывая гликоалкалоиды небольшими порциями 1 /о-ного аммиака. (Осадок гликоалкалоидов для лучшей промывки нужно оставлять в колбе).

Промывание проводят до тех пор, пока фильтрат не станет бесцветным. Фильтр и колбу с осадком высушивают досуха в сушильном шкафу при температуре 80—90 °С. Высушенный фильтр с осадком помещают в колбу № 2 и гликоалкалоиды растворяют при нагревании на водяной бане в 100 мл 95%-його этилового спирта, прибавляя его небольшими порциями в колбу, и переносят раствор в стакан для потенциометрического титрования Полученный раствор титруют потенциометрически 0,1 н. НСІ. В начале титрования прибавляют по 0,5—1 мл 0,1 н. НС1, а когда разность потенциалов достигнет заметкой величины — по 0,05 мл.

1 мл 0,1 н. НС1 соответствует 0,04137 г соласодина. Процентное содержание соласодина в пересчете на абсолютно сухую массу сырья х вычисляют по формуле

У0,04137 ■ 600 ■ 100- 100 т (100—ш) 200 ’

где у— объем 0,1 н. НС1, израсходованный на титрование, мл; т — масса навески воздушно-сухого сырья, г; w — потеря в массе при высушивании сырья, %.

Содержание соласодина в траве паслена дольчатого должно быть не менее 0,8 %.

1, Раствор формалина в H2S04 готовят смешением 10 мл концентрированной HsS04 с 0,2 мл формалина. Срок хранения не более 1 мес.

2. 2—3 капли последнего этанольного экстракта наносят на фильтровальную

бумагу, высушивают и помещают в камеру о парами иода (не должно быть желтого пятна). ..

Реактивы и оборудование: уксусная кислота Ь и 1%-ная; аммиака раствор 1 и 25%-ный; этиловый спирт (этанол) 95%-ный; HsSO„ (кони,); формальдегид; иод; HCI (0:1 я.).

Колбы плоскодонные вместимостью 1,0—1,5 л; стаканы стеклянные вместимостью 500 мл; воронки Бюхнера; колбы Бунзена; чашки Петри; колбы круглодонные с нормальным шлифом вместимостью 250 мл; холодильники обратные стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; установка для отгонки растворителей; стаканы для потенциометрического титрования; бани водяные лабораторные; термометр ртутный стеклянный лабораторный; фильтры бумажные; шкаф сушильный лабораторный; медицинская резиновая груша.

Методика определения содержания соласодина в траве паслена дольчатого экспресс-методом. Экспресс-метод предназначен для быстрой оценки образцов паслена для отбора селекционных образцов с содержанием соласодина выше заданного значения. Метод имеет ориентировочное значение. В дальнейшем количественными методами устанавливается точное содержание соласодина. Предварительная оценка проводится при хроматографическом разделении по размеру пятна и интенсивности окраски после проявления.

0,5 г измельченных листьев паслена (сито № 2) помещают в колбу вместимостью 25 мл, заливают Ш мл этилового спирта и экстрагируют с обратным холодильником в течение 30 мин на кипящей водяной бане. Содержимое колбы фильтруют в горячем виде через стеклянную воронку с плотным тампоном ваты в коническую колбу вместимостью 50 мл. Осадок на фильтре промывают 15 мл этилового спирта (дробно). Фильтрат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем экстракта доводят спиртом до 25 мл, раствор перемешивают. Отбирают пипеткой из колбы 1 мл раствора и из бюретки добавляют к данной пробе 3 мл этилового спирта (рабочий раствор). Пипеткой наносят 0,005 мл рабочего раствора на пластинку «Силуфол» на расстоянии 1 см от края пластинки. На одну пластинку можно наносить несколько проб. Расстояние между точками нанесения 12—15 мм. Диаметр пятна на старте не должен превышать 5 мм. В качестве контроля используют рабочий раствор из листьев паслена дольчатого, содержащих точно определенное количество соласодина.

Пластинку закрепляют вертикально в камере, погружая нижний край пластинки в растворитель не более чем на 1—2 мм. В качестве подвижной фазы используют систему хлороформ — метиловый спирт — вода (61 і 32 : 7). Для лучшего насыщения с 3 сторон камеры помещают фильтровальную бумагу. Когда растворитель поднимается до верхнего края пластинки, ее вынимают и сушат в течение 5 мин в сушильном шкафу при 100 °С. Пластинку охлаждают на воздухе в течение 2—3 мин, равномерно опрыскивают 20%-ной H*S04 в этиловом спирте. Пластинку высушивают в течение 2—3 мин на воздухе и помещают в открытый сушильный шкаф при 100 °С на 2—3 мин до появления малиновых пятен.

Хроматограмму закрывают стеклом и визуально сравнивают размер и интенсивность окраски пятен анализируемых и контрольных образцов. Через 20—30 мин, когда пятна начинают исчезать, хроматограмму просматривают повторно (рис. 33). Контрольный экстракт, из которого готовят рабочий раствор, можно хранить в плотно закрытой колбе в холодильнике 1 мес (если не образуется осадок).

Реактиви и оборудование: этиловый спирт (этанол) 95%-ный; метиловый спирт (метанол); хлороформ; НД04 (кони.); вода дистиллированная.

Пластинки «Силуфол»; колбы плоскодонные с нормальным шлифом вместимостью 25 мл; холодильники обратные стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; колбы конические вместимостью 25 и

50 мл; колбы мерные вместимостью 25 мл; микропипетка измерительная вместимостью 0,01 мл; пульверизатор стеклянный герметический; камера хроматографическая Для ТСХ; шкаф сушильный лабораторный; бани водяные лабораторные; плитка электрическая бытовая; бюретки вместимостью Ш мл; вата гигроскопическая.

<< | >>
Источник: Коллектив авторов. Химический анализ лекарственных растений: Учеб, пособие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафро- нич Л. Н., Отряшенкова В, Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. И., Сафронич Л. Н.■— М.: Высш. школа, 1983,— 176 с., ил.. 1983
Помощь с написанием учебных работ

Еще по теме § 5. Количественное определение:

  1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ. ТАБЛИЦА 4. ТЕСТ-ОРГАНИЗМЫ И УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ АНТИБИОТИКОВ
  2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
  3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ВСАСЫВАНИЯ ЛЕКАРСТВ
  4. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ПРОЧНОСТИ СВЯЗЫВАНИЯ
  5. 9.3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ЭЛИМИНАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
  6. Количественные и качественные дефекты фагоцитов
  7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТОКСИЛЬНЫХ ГРУПП
  9. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
  10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ pH
  11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
  12. Г. Определение точки кипения
  13. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЯ ПРЕЛОМЛЕНИЯ
  14. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА
  15. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЙОДНОГО ЧИСЛА