<<
>>

Метод тёмного поля

Метод тёмного поля позволяет наблюдать светящиеся структуры препарата на тёмном фоне. Так, например, при изучении препарата с живыми бактериями или клеток слизистой щеки фон будет чёрным, а двигающиеся бактерии или клетки будут выглядеть светящимися, белыми и, следовательно, легко обнаруживаться.

На практике метод темного поля реализуется двумя способами.

При использовании объективов с низким увеличением (до 40х) центральная часть апертурной диафрагмы конденсора закрывается непрозрачным диском из стекла или металла так, что пучок лучей выходит из конденсора в виде полого конуса и непосредственно в объектив не попадает. Изображение объекта создается только рассеянными (дифрагированными) структурами препарата лучами.

При использовании объектива 100х необходимо уменьшить апертуру объектива до значения несколько ниже 1,0 (в противном случае препарат будет засвечен, и детали не будут видны). Это достигается с помощью ирисовой диафрагмы в объективе (наилучший вариант, так как её можно закрыть для тёмного поля и открыть для светлого) или тем, что в зрачок объектива (заднюю фокальную плоскость объектива) помещается тёмнопольное кольцо, обеспечивающее апертуру объектива меньшую или равную 1,0.

Далее, мы должны использовать соответствующий тёмнопольный конденсор. Раньше при использовании тёмнопольных конденсоров только V4 часть поля зрения, центральная, была хорошо освещена, остальные участки были размыты. С современными тёмнопольными конденсорами всё поле зрения освещено и находится в фокусе. Этот вид конденсоров требует, чтобы при использовании всех объективов, начиная с 20х, между верхней линзой конденсора и нижней поверхностью предметного стекла находилось иммерсионное масло типа Б. Когда применяется иммерсионный объектив, масло должно находиться также между препаратом и фронтальной линзой объектива.

Лучшим примером проделанной работы с использованием данного метода микроскопии являются исследования препаратов, полученных при венерических заболеваниях. Так, трихомонады в этих препаратах хорошо видны в тёмном поле. А поскольку мы теперь не красим наши препараты, то всё живое остаётся живым.

Темнопольный конденсор лёгок в использовании и хорошо центрирован средствами, поставляемыми производителем. Кроме того, и сам оператор должен иметь возможность центрировать конденсор в случае необходимости, для чего последний должен иметь соответствующие винты настройки.

Для того чтобы увидеть бесцветные — прозрачные или полупрозрачные — препараты, вы должны окрасить их соответствующими красителями. Фазовый контраст был разработан Цернике (Zernike) для наблюдения за живыми организмами без окрашивания и изучения деталей прозрачных и полупрозрачных препаратов.

Обычно при методе фазового контраста апертурная диафрагма широко открыта. В плоскость прямо под конденсором, непосредственно над апертурной диафрагмой помещается круглая стеклянная пластинка с непрозрачным центром, прозрачным кольцом и непрозрачной внешней частью. Свет проходит через прозрачное кольцо, как через пончик, затем через конденсор и препарат. В задней фокальной плоскости объектива имеется противоположный диск: прозрачный центр, непрозрачное кольцо и прозрачная внешняя часть.

С фазовым телескопом (визирная трубка, помещаемая вместо окуляра) наблюдатель может сфокусироваться и увидеть оба кольца одновременно: чёрное кольцо в объективе и изображение светлого кольца конденсора.

Светлое кольцо может быть центрировано относительно чёрного. Центрирование внутри объектива слишком сложно, но зато можно центрировать прозрачное кольцо под конденсором, поскольку оно доступно для настройки. Полная концентричность не требуется, но требуется полное перекрытие колец: светлое кольцо должно находиться внутри тёмного.

Фазовое кольцо действует двояко. Во-первых, оно поглощает значительную часть прямо прошедшего через светлое кольцо света, для чего на него нанесена полупрозрачная плёнка металла. Во-вторых, оно сдвигает фазу световых колебаний примерно на 1/4 длины волны. Это позволяет сделать прозрачные и полупрозрачные детали полностью видимыми, причём клетки остаются живыми, так как они не подвергаются окрашиванию. Теперь можно полностью рассмотреть детали эпителиальных клеток, их форму, размер, а также ядра и гранулы; живая бактерия обнаруживается сначала в тёмном поле, а затем изучается в фазовом контрасте.

Цернике спроектировал свою систему так, что в ней имелось одно кольцо, подобранное по размерам для 10х, одно кольцо для 20 и 40х и ещё одно для 100х с

четвёртой позицией для светлого поля. Все масляные объективы работают с кольцом 100х.

Большинство фазовоконтрастных систем, используемых сегодня, подобны друг другу. Только одна компания делает систему с одним кольцом для объективов 10х, 20х, 40х и со вторым для объектива 100х; третья позиция в конденсоре предусмотрена для объектива 40х тёмного поля, четвертая — для работы в светлом поле с апертурной диафрагмой, центрированной на производстве без возможности корректировки со стороны пользователя.

У некоторых исследовательских микроскопов в бинокулярную насадку встроена линза Бертрана. Эта линза имеет возможность фокусировки для того, чтобы увидеть оба кольца, позволяя, таким образом, центрировать элемент конденсора (кольцевую диафрагму конденсора). Линза Бертрана выполняет функцию фазового телескопа, но наблюдатель в этом случае смотрит через бинокулярную насадку и окуляры.

Фазовый контраст бывает позитивным (тёмные структуры на светлом фоне), и негативным (светлые структуры на тёмном фоне).

В первом случае апертурная диафрагма широко открыта, во втором — закрыта так. чтобы заблокировать внешнее кольцо.

Обычная проблема при работе с фазовым контрастом — ореолы вокруг всех деталей препарата, которые мешающие извлечь нужную для вас информацию. И все же польза от фазового контраста перевешивает все его недостатки. Дифференциальный Интерференционный Контраст (DIC) по Номарскому решает проблему с ореолами, но при этом появляется другая проблема (см. далее описание этой системы).

Рис. 9. Фазовый контрастный набор


<< | >>
Источник: Ф. М. Кэррил, С. А. Бабушкин. Как работать со световым микроскопом / Ф. М. Кэррил; (перевод с английского и под редакцией И. Я. Барского, М. М. Аптинова), С. А. Бабушкин. - Москва.: Вест Медика,2010.— 112 с.. 2010

Еще по теме Метод тёмного поля:

  1. Электромагнитные поля
  2. II. ПОДГОТОВКА ОПЕРАЦИОННОГО ПОЛЯ
  3. СОВРЕМЕННЫЕ СПОСОБЫ ОБРАБОТКИ РУК ХИРУРГОВ И ОПЕРАЦИОННОГО ПОЛЯ
  4. ГЛАВА 5 ЛЕЧЕБНОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПОСТОЯННОГО, ИМПУЛЬСНОГО И НИЗКОЧАСТОТНОГО МАГНИТНОГО ПОЛЯ
  5. История российского нормативно-правового поля в области регулирования рынка БАД
  6. Коллектив авторов. СОВРЕМЕННЫЕ СПОСОБЫ ОБРАБОТКИ РУК ХИРУРГОВ И ОПЕРАЦИОННОГО ПОЛЯ / Д. В. Балацкий, Н. Б. Давтанян - Барнаул: изд-во «Концепт»2012, 2012
  7. Основные параклинические методы, используемые в системе медицинского обследования спортсменов. Электрофизиологические методы
  8. Традиційні методи контрацепції. Бар’єрні методи контрацепції
  9. 6. Лучевые методы лечения
  10. Методи підготовки вагітних до родів. Медикаментозні методи підготовки вагітних до родів
  11. МЕТОД ЛАКТАЦІЙНОЇ АМЕНОРЕЇ
  12. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  13. Функциональные методы
  14. Природні методи контрацепції
  15. ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
  16. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ