<<
>>

§ 3. Методы выделения

Выделение сапонинов из растительного сырья включает следующие стадии: 1) получение экстракта; 2) выделение из него суммы сапонинов и их очистка от сопутствующих веществ; 3) разделение сапонинов на индивидуальные гликозиды.

Обычно суммарный экстракт для выделения сапонинов чаюі обработкой сырья полярными растворителями: метил или этиловым спиртом и водой. Сырье предварительно обрабатыва.__ петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом для разрушения комплексов сапонинов со стеринами.

Методы выделения суммы сапонинов из экстракта зависят от их строения.

Гликозиды с небольшим числом моносахаридных остатков (3 4) обычно плохо растворимы в воде и выпадают в осадок при разбавлении спиртовых растворов водой. Полярные сапонины плохо растворимы в метиловом и этиловом спиртах и выпадают в осадок при охлаждении или продолжительном стоянии спиртовых растворов, либо при добавлении спирта к водным и водноспиртовым растворам. Кислые сапонины растворимы в водных растворах щелочей и выпадают в осадок при подкислении. Из спиртовых растворов тритерпеновые сапонины осаждают этиловым эфиром, ацетоном, этилацетатом, а некоторые — бутиловым и изо- амиловым спиртами. Из водных растворов сопутствующие малополярные примеси извлекают этиловым эфиром, хлороформом, четырех хлор истым углеродом, а тритерпеновые гликозиды — бутиловым или изоамиловым спиртом.

Полученные сапониновые фракции очищают повторным пере- осаждецием, что, однако, не приводит к полной очистке от полярных сопутствующих веществ: неорганических примесей, моно- и олигосахаридов, гликозидов других классов, органических кислот и др. Ряд методов основан на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидроксидом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, танинами, белками. Соли затем разлагают угольной или серной кислотами; холестериновые комплексы — извлечением холестерина бензолом, толуолом, этиловым эфиром или пиридином; таниновые — кипячением с водной суспензией оксида цинка; белковые — извле- чением гликозидов подходящими органическими растворителями.

Эта группа методов дает более чистую сумму сапонинов, но не является общей методикой и не гарантирует количественного выделения и отсутствия значительного содержания балластных веществ в отдельных случаях.

Сапонины, образующие коллоидные растворы, очищают от примесей, дающих истинные растворы (моносахариды, минеральные вещества), с помощью диализа и электролиза. Хорошие результаты очистки сапониновых фракций от растительных пигментов и восстанавливающих сахаров получены при гельфильтпации на сефа- дексах У-25, У-50, А-25. ^

Значительное распространение нашли хроматографические методы очистки суммы сапонинов. Гликозиды, содержащие свободные карбоксильные группы, могут быть отделены от сопутствующих веществ,^ в том числе и от минеральных примесей, с помощью ионообменной хроматографии. Хроматографическую очистку суммы сапонинов проводят на оксиде алюминия, силикагеле, активированном угле.

В отличие от других классов природных соединений (аминокислот, углеводов ит. п.) для сапонинов нет универсальных систем элюирования. Для нейтральных сапонинов наиболее подходящие системы: н-бутиловый спирт—этиловый спирт — вода; н-бутило- вый спирт — уксусная кислота — вода (в различных соотношениях, верхний слой); хлороформ — метиловый спирт — вода (65 : 35 : 10).

Для обработки хроматограмм можно использовать те же реактивы, что и при проведении цветных реакций на сапонины.

Так, для обнаружения стероидных сапонинов хроматограмму сначала опрыскивают 1%-вым спиртовым раствором SbCi3, а затем после высушивания H3S04 с уксусным ангидридом образуются желтые пятна.

Для обнаружения тритерпенових сапонинов применяют раствор 20%-ной H2S04. После обработки хроматограммы этим раствором с последующим нагреванием в сушильном шкафу при f = 115 120 °С в течение 15 мин появляются фиолетовые пятна. Используют также насыщенный хлороформный раствор SbCI3 со следами SbClft, который дает с тритерпеновими сапонинами розово-фиолетовое окрашивание.

При выяснении структуры сапонинов, как и других гликозидов, определяется строение агликона и углеводной части, а также выясняется место и способ присоединения углеводной составляющей к агликону.

При установлении строения санонинов помимо традиционных методов (элементарный анализ, определение молекулярной массы) широко используются методы УФ спектроскопии, ИК спектроскопии, ПМР спектроскопии.

ИК спектроскопия при исследовании тритерпенов Применяется для обнаружения и характеристики двойных связей, гидроксильных групп, О-ацильных группировок, карбонильных, карбоксильных, геминальных и ангулярных метильпых групп. По характерным полосам поглощения СН3-групп в области 1245 1392 см

отличают тетрациклические тритерпены от пентациклических групп а- и р-амирина, а также последние друг от друга. По ИК спектрам продуктов окисления оксидом рутения (IV) предложен метод доказательства положения изолированной двойной связи в тритерпенах.

Строгое отнесение сапонинов к стероидам может быть сделано на основании ИК спектров и их генинов: наличие полос поглощения при 852 (866), 900 (900), 922 (922), 987 (982) см'1 (спирокеталь- ная группировка нормального и шо-рядов) позволяет однозначно отнести сапонины к стероидному ряду.

В последнее время при исследовании структур пентациклических тритерпенов получила распространение масс-спектрометрия и методы ПМР спектроскопии.

Систематическое исследование дисперсии оптического вращения оксопроизводных пентациклических тритерпенов позволяет решать вопросы, связанные с доказательством их строения и стереохимии (установление положения карбонильных групп и гидроксильных после перевода в карбонильные, положение двойной связи, конфигурация отдельных асимметрических центров).

Установление строения углеводного остатка тритерпенових и стероидных сапонинов осуществляется с помощью методов структурной химии олиго- и полисахаридов. Сюда входит: 1) определение качественного и количественного состава моносахаридов; /) установление последовательности моносахаридных остатков в углеводной цепи; 3) определение положения гликозидных связей в моносахаридных остатках; 4) определение размеров оксидных циклов моносахаридов; 5) установление конфигурации гликозидных центров.

<< | >>
Источник: Коллектив авторов. Химический анализ лекарственных растений: Учеб, пособие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафро- нич Л. Н., Отряшенкова В, Э. и др. Под ред. Гринкевич Н. И., Сафронич Л. Н.■— М.: Высш. школа, 1983,— 176 с., ил.. 1983

Еще по теме § 3. Методы выделения:

  1. ЭКСПРЕСС-МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ПГ ГРУПП Е И F ИЗ ЖИВОТНЫХ ОБЪЕКТОВ
  2. 51.3. Исследование других выделений организма человека (мекония, сыровидной смазки, около­плодной жидкости, молока, молозива, кала, выделений из влагалища)
  3. ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ ПОЛОВЫХ ПУТЕЙ
  4. НЕОБЫЧНЫЕ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ ВЛАГАЛИЩА
  5. 51.2. Исследование слюны, мочи, пота и потожировых выделений
  6. Глава 51. Судебно-медицинское исследование других выделений. 51.1. Общие положения
  7. ПГ НА ОСНОВЕ ПРЕКУРСОРОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ГОЛОМЯНКИ БОЛЬШОЙ
  8. 51.5. Основные вопросы, решаемые судебно-медицинской экспертизой при исследовании других выделений
  9. Исследование механизма действия хромогликата in vitro. Подавление выделения гистамина тучными клетками
  10. Основные параклинические методы, используемые в системе медицинского обследования спортсменов. Электрофизиологические методы
  11. Традиційні методи контрацепції. Бар’єрні методи контрацепції
  12. Методи підготовки вагітних до родів. Медикаментозні методи підготовки вагітних до родів
  13. МЕТОД ЛАКТАЦІЙНОЇ АМЕНОРЕЇ