BLEOMYCINI HYDROCHLORIDUM. БЛЕОМИЦИНА ГИДРОХЛОРИД. Блеомицина гидрохлорид (не для инъекций). Блеомицина гидрохлорид стерильный

Состав. Блеомицина гидрохлорид — это солянокислая соль смеси веществ, продуцируемых при росте Streptomyces verticillus. Основными компонентами этой смеси являются блеомицин А2 и блеомицин В2; per. № CAS 67763-87-5.

Молекулярная формула. Блеомицина Аг гидрохлорид: C55H84N17O21S3 • С1. Блеомицина В2 гидрохлорид: C55H84N20O21S2X ХНС1.

Относительная молекулярная масса. Блеомицина Аг гидрохлорид: 1452; блеомицина В2 гидрохлорид: 1461

Структурные формулы оснований блеомицина Аг/В2.

Химическое наименование.

Блеомицина В2 гидрохлорид: Ап-(гуанидинобутил)блеомицин-

амида гидрохлорид; (р5)-4-амино-|3-[ [ (25)-2-а.мино-2-карбамо- илэтил]амино]-6-[ [ (15,2/?) -2-[ [2-0-(3-0-карбамоил-а - d - манно- пиранозил)a-L-гулопиранозил]окси]-1-[ I (1/?,25,35)-3-[ [ (15, 2R)-

1- 1[2-[4-[ (4-гуанидинбутил)карбамоил] [2,4'-битиазол]-2'-ил] этил ] карба мои л ] -2-гид роксипропил]карбамоил]-2-гидрокси-1-метил бутил ]карбамоил]-2-имидазол-4-илэтил]карбамоил]-5-метил-

2- пиримидиниропионамида гидрохлорид; /Vі-[4-[ (аминоимино.ме- тил)амино]бутил]блеомицинамида гидрохлорид; per. № CAS 55658-44-1.

Описание. Белый или желтовато-белый порошок.

Растворимость. Легко растворим в воде и метаноле Р; мало растворим в этаноле (~750 г/л) ИР; практически нерастворим в ацетоне Р и эфире Р.

Категория. Цитотоксическое средство.

Хранение. Блеомицина гидрохлорид следует хранить в плотно укупоренной таре.

Указание на этикетке. Указание «Стерильный блеомицина гидрохлорид» означает, что данное вещество отвечает дополнительным требованиям, предъявляемым к стерильному блеомицина гидрохлориду, и может быть использовано для .парентерального введения 'или других видов стерильного применения. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: с блеомицина гидрохлоридом следует обращаться осторожно, избегая его попадания на кожу и вдыхания.

ТРЕБОВАНИЯ

Общее требование. Блеомицина гидрохлорид содержит при количественном определении методом А не менее 1500 и не более 2000 ME блеомицина А2/В2 в 1 мг в пересчете на высушенное вещество.

Кроме того, при количественном определении методом Б блео- мицина гидрохлорид содержит не менее 55,0 и не более 70,0% блеомицина А2 и не менее 25,0 и не более 32,0% блеомицина В2; общее количество блеомицина А2 и блеомицина В2 не менее 85%• Содержание блеомицина А5 не более 7,0%, блеомицина В4 не более 1,0% и деметилблеомицина А2 не более 3,0%.

Подлинность

А. Растворяют около 5 мг испытуемого вещества в 10 мл воды, добавляют 5 мкл раствора сульфата меди (II) (160 г/л) ИР и разводят водой до 100 мл; спектр поглощения дает максимумы при около 242 и 290 нм и минимум при ~268 нм.

Б. Раствор испытуемого вещества с концентрацией 10 мг/мл дает характерную для хлоридов реакцию Б, описанную в разделе «Общие испытания на подлинность» (т.

Потеря при высушивании. Высушивают 4 ч при 60°С и пониженном давлении (не выше 0,6 кПа или около 5 мм рт. ст.); потеря составляет не более 60 мг/г.

PH раствора. pH раствора испытуемого вещества с концентрацией 5,0 мг/мл составляет 4,5—6,0.

Содержание меди. Помещают 75 мг испытуемого вещества (точная навеска) в делительную воронку объемом 60 мл и растворяют в 10 мл соляной кислоты (0,1 моль/л) ТР. Помещают 10 мл раствора стандарта меди ИР2 в отдельную делительную воронку. В обе воронки добавляют по 10 мл раствора цинка бис (ди- бензилдитиокарбамата) ИР и энергично встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям разделиться. Фильтруют нижний слой через 1 г безводного сульфата натрия Р для удаления избыточной воды. Измеряют поглощение в кювете С ТОЛЩИНОЙ слоя 1 см при максимуме около 435 нм против контрольной кюветы, содержащей тетрахлорид углерода Р.

Содержание меди в мг/г рассчитывают по формуле (v40X 15) / (УЦ.Х№), где А0 — поглощение испытуемого вещества, As — поглощение стандарта меди ИР2 и W— масса (в мг) испытуемого вещества; содержание меди не более 0,2 мг/г

Количественное определение

А. Количественное определение микробиологической активности. Проводят испытание, как описано в разделе «Количественное определение микробиологической активности антибиотиков» (т. 1, с. 165), используя Mycobacterium smegmatis (штамм АТСС 607) в качестве тест-организма. Инокулят готовят следующим образом: тест-организм выращивают на поверхности культуральной среды Кс8 в течение 40—48 ч при температуре 27 °С. Тремя миллилитрами физиологического раствора ИР смывают колонии в колбу, содержащую 100 мл культуральной среды Кс9 и 50 г стеклянных гранул, и инкубируют при 25—27 °С 5 дней при постоянном механическом перемешивании с использованием роллера. Полученную суспензию следует использовать не позднее чем через 14 дней и хранить при температуре ниже 5 °С. Для приготовления инокулированных чашек используют 0,5 мл суспензии или соответствующий объем, предварительно определенный с помощью тест-чашек с культуральной средой Кс8 при температуре 27 °С. Готовят эталонный раствор в фосфатном буфере pH 7,0 ИР, разводя Международный эталонный препарат блеомицина Аг/В2 до соответствующей концентрации (обычно 10—200 мкг/мл). Точность определения такова, что фидуциальные пределы ошибки для найденной активности (Р = 0,95) не менее 95 и не более 105% найденнной активности. Верхний фидуциальный предел ошибки найденной активности (Р = 0,95) не менее 1500 ME, а нижний фидуциальный предел не более 2000 ME блеомицина Л2/В2 в 1 мг в пересчете на высушенное вещество.

Б. Содержание компонентов блеомицина. Проводят определение, как описано в разделе «Высокоэффективная жидкостная хроматография» дополнений к т. 1, используя колонку высотой 25 см и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненную частицами силикагеля 5—10 мкм в диаметре, поверхность которых модифицирована химически связанными октадецилсилильными группами. Линейный градиент подвижной фазы начинается смесью 9 объемов 1-пентансульфоновой кислоты ИР и 1 объема метанола Р (оба вещества предварительно фильтруют и дезаэрируют) и заканчивается смесью 6 объемов 1-пентапсульфоновой кислоты ИР

и 4 объемов метанола Р; подбирают такую линейную скорость изменения состава подвижной фазы, которая обеспечивает достижение окончательного состава через 60 мин. (При необходимости для получения удовлетворительных результатов хроматографии к подвижной фазе добавляют 1,86 г эдетата динатрия Р на 1 л.) В качестве детектора используют ультрафиолетовый спектрофотометр при длине волны около 254 нм, снабженный малообъемной проточной кюветой (подходит объем 8—20 мкл). Вводят 5 мкл раствора испытуемого вещества в воде, содержащего 5 ME блеомицина в 1 мл. Проводят градиентную элюцию, вводя подвижную фазу при вышеописанных условиях в течение 80 мин или пока не будет элюирован блеомицин А2.

Порядок элюции компонентов блеомицина таков: свободный объем, блеомициновая кислота, блеомицин А2, блеомицин В2, блеомицин As, блеомицин В4 и деметилблеомицин А2.

Рассчитывают процентное содержание каждого компонента блеомицина путем сравнения площадей отдельных пиков с общей площадью пиков всех блеомицинов.

Дополнительные требования к стерильному блеомицина гидрохлориду

Хранение. Стерильный блеомицина гидрохлорид следует хранить в герметически укупоренной таре.

Гистаминоподобные вещества. Проводят испытание, как описано в разделе «Испытание на гистаминоподобные вещества» (т. 1, с. 178), используя на 1 кг массы тела 1 мл раствора в физиологическом растворе ИР, содержащего количество, соответствующее 500 МЕ/мл.

Неспецифическая токсичность. Проводят испытание, как описано в разделе «Неспецифическая токсичность» (т. 1, с. 176), используя 0,5 мл раствора в физиологическом растворе ИР, содержащего количество, соответствующее 5000 ME блеомицина гидрохлорида в 1 мл.

Пирогенность. Проводят испытание, как описано в разделе «Испытание на пирогенность» (т. 1, с. 176), вводя кролику на 1 кг массы тела 1 мл раствора в физиологическом растворе ИР, содержащего 500 ME блеомицина гидрохлорида.

Стерильность. Выдерживает «Испытание антибиотиков на стерильность» (т. 1, с. 172); используют методику мембранной фильтрации.