<<
>>

Высокоэффективная жидкостная хроматография[5]

Заменяют текст следующим расширенным вариантом:

Этот недавно введенный метод хроматографии вновь выдвинул на передний край хроматографию на колонках — самую старую форму аналитического искусства. Основное достижение, благодаря которому стало возможным применение нового метода, — это технология получения частиц, устойчивых к высокому давлению и имеющих одинаковый диаметр менее 50 мкм. Более ранние типы частиц обычно имеют твердый центр, например из стекла, и тонкий пористый наружный слой, например из кремнезема; благодаря небольшому размеру и большой площади поверхности этих частиц обеспечивалась высокая эффективность адсорбционной хроматографии. Если частицы покрыты подходящей неподвижной фазой, высокоэффективную жидкостную хроматографию можно использовать как метод распределения.

Позднее были созданы кремнеземовые гранулы с одинаковым диаметром около 5 мкм (или 3 мкм); они полностью пористые и могут иметь площадь поверхности до 300 м2/г. Благодаря этому они обеспечивают более эффективное разделение, чем частицы размером 30—50 мкм. Для приготовления колонок большие частицы можно укладывать сухими, но частицы диаметром 5 мкм в основном упаковывают в виде геля.

Для обеспечения стабильных параметров колонки неподвижную фазу часто связывают химически с носителем (обычно с помощью простои или сложной эфирной связи). Простая эфирная связь обеспечивает более устойчивый продукт, чем сложноэфирная связь, которая может гидролизоваться полярными растворителями; например, в покрытых октадецилсиланом гранулах углеводородная цепь связана простой эфирной связью со стеклянными гранулами, покрытыми тонким слоем кремнезема, и это обеспечивает весьма эффективную систему с обращенной фазой, которая исключительно стабильна в работе. Для целей хроматографии этими частицами заполняют колонки с узким внутренним диаметром (обычно 2—4 мм); совершенно ясно, что такой мелкий материал, упакованный в длинные колонки, будет создавать значительное сопротивление потоку подвижной фазы, в силу чего и необходимо применять высокое давление. Типичная длина колонок составляет 20—30 см, при количественном анализе обычно используют скорость элюции около 1—3 мл/мин и давление до 28 000 кПа.

Кроме адсорбционного и распределительного способов, рассмотренных выше, принцип метода высокого давления применим и к ионообменной хроматографии при условии наличия подходящих смол в виде достаточных мелких, устойчивых к давлению частиц.

Естественно, что такое высокое давление требует и специального оборудования. К основным частям прибора относятся подходящий насос для подачи на колонку подвижной фазы из закрытого резервуара с растворителем, устройства для нанесения испытуемого вещества на колонку (обычно это инжекторный клапан, предназначенный для работы при высоком давлении), сама колонка (часто определение проводят при комнатной температуре, но иногда колонку держат при более высоким температурах), соответствующая детекторная система и усилитель, связанный с подходящим регистрирующим устройством, таким как ленточный самописец, позволяющий строить график зависимости сигналов от времени, или электронный интегратор.

В качестве детекторов наиболее часто применяют устройства, основанные на ультрафиолетовой спектрофотометрии, на измерении показателя преломления или интенсивности флуоресценции. Для фармацевтических целей наиболее подходит ультрафиолетовый спектрофотометр вследствие его высокой чувствительности (нижний предел обнаружения составляет 1—2 нг для материала, имеющего хорошие светопоглощающие свойства) и стабильности (в частности, он отличается низкой чувствительностью к контролируемым изменениям в составе растворителя и неравномерности потока); естественно, что такой детектор не может быть использован, если элюируется материал, не имеющий заметного поглощения в ультрафиолетовой области.

Рефрактометр реагирует на разницу в показателе преломления чистой подвижной фазы и подвижной фазы, содержащей элюируемый материал; этот метод применяют более широко, чем адсорбционную спектрофотометрию в ультрафиолетовой области, но он малочувствителен, и результаты во многом зависят от небольших изменений в составе растворителя, скорости потока и температуры.

Коэффициент распределения К определяется для хроматографируемого вещества следующим отношением:

Количество вещества в неподвижной фазе

1\ = -------- -

Количество вещества в подвижной фазе

Этот коэффициент определяет время задержки различных веществ и может быть рассчитан экспериментально по следующей формуле:


где t — время задержки вещества, t0 — время задержки не связывающего компонента.

В некоторых случаях, в частности, в опытах, имеющих целью определение оптимального состава растворителя для метода, который затем будет использоваться повседневно, удобна методика градиентной элюции. Состав смеси растворителей, входящих в подвижную фазу, во время хроматографирования непрерывно меняют с предварительно установленной скоростью, что дает возможность на одной хроматограмме разделить сложную смесь веществ, имеющих совершенно разные коэффициенты распределения.

При использовании методов расчета, аналогичных описанным в разделе «Газовая хроматография», методика высокого давления дает возможность получать более точные результаты и поэтому чрезвычайно удобна для количественных определений. Эта методика требует мало времени и используется для осуществления многих высокоэффективных разделений, однако для ее применения нужны специальные приборы и во многих случаях дорогостоящие материалы для заполнения колонок. Потенциальное преимущество этой методики перед газовой хроматографией состоит в том, что летучесть и термостабильность, факторы столь важные для последней, не имеют никакого значения для жидкостной хроматографии. К ее недостаткам в настоящее время относится отсутствие универсальной детекторной системы.

28—286

<< | >>
Источник: ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ. МЕЖДУНАРОДНАЯ ФАРМАКОПЕЯ ТРЕТЬЕ ИЗДАНИЕ. Том 3. Спецификации для контроля качества фармацевтических препаратов. ЖЕНЕВА.1990. 1990
Помощь с написанием учебных работ

Еще по теме Высокоэффективная жидкостная хроматография[5]:

  1. Жидкостная хроматография высокого давления
  2. ХРОМАТОГРАФИЯ
  3. Газовая хроматография
  4. Тонкослойная хроматография
  5. РАЗДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ САЛАЗОПИРИДАЗИНА И САЛАЗОДИМЕТОКСИНА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
  6. Источники ИЛ-2
  7. Методы анализа лекарственных средств
  8. Краткая история автоматизации лаборатори
  9. Обработка (фиксация) мазка
  10. ТЕРПЕНОИДЫ
  11. Тиамина хлорид
  12. CARBIDOPUM КАРБИДОПА