<<
>>

Оценка показателей клеточного иммунитета

Первым этапом лабораторной диагностики является количественная оценка клеток периферической крови и их морфологических элементов — подсчет лейкоцитарной формулы. При этом анализе следует обращать внимание не только на относительное, но и на абсолютное число клеток крови.

При определении нормальных показателей формулы крови в относительных значениях пересчет в абсолютные значения может выявлять патологию и наоборот.

Количество лейкоцитов и других клеток крови зависит от скорости выхода клеток из костного мозга и притока их в ткани. Число лейкоцитов в периферической крови выше 10И09 клеток/л определяется как лейкоцитоз, ниже 4*109 кл./л - как лейкопения. Основные причины лейкоцитоза - все виды инфекций, воспалительные состояния, злокачественные новообразования, травмы, лейкозы, уремия, действия адреналина и стероидных гормонов. Лейкопения встречается при аплазии и гипоплазии красного костного мозга, гиперспленизме, острых лейкозах, миелофиброзах, плазмоцитомах, метастазах новообразования в костный мозг, тяжелых инфекциях, коллагенозах (неблагоприятный признак), под действием лекарственных средств.

Известны различные отклонения лейкоцитарной формулы, которые могут свидетельствовать в комплексе с другими лабораторными данными о различных патологических состояниях.

Лейкоцитоз со сдвигом влево может наблюдаться при бактериальных инфекциях (неспецифических и специфических), интоксикациях (отравлении угарным газом, грибами и пр.), коматозных состояниях (уремия, диабетическая, печеночная и др.), после острых кровопотерь, во время гемолитического криза. Так же выявляется на ранних этапах послеоперационного периода, после больших хирургических вмешательств, во время и после родов, при злокачественных новообразованиях, лейкозах, лучевой болезни (на ранней фазе массивного радиационного поражения).

Лейкоцитоз со сдвигом вправо может наблюдаться при вирусных и хронических бактериальных (туберкулез, сифилис, бруцеллез и пр.) инфекциях, дефиците фолиевой кислоты, лучевой болезни, сепсисе.

Нейтропения обычно сочетается с лейкопенией при тяжелых и вирусных инфекциях, аутоиммунных и лекарственных лейкопениях, Bi2- дефицитных анемиях, гипоксии, голодании, авитаминозе.

Эозинофилия выявляется при аллергических заболеваниях (бронхиальной астме, лекарственной аллергии и др.), глистной инвазии, кожных, аутоиммунных и инфекционных заболеваниях в период развития клинической картины и на этапе выздоровления, при злокачественных новообразованиях, при лимфогранулематозе.

Эозинопения имеет место при стрессовых ситуациях, острых инфекциях, интоксикациях, шоке, инфаркте миокарда.

Базофилия встречается при лечении гепарином, введении сыворотки, диабете, микседеме, нефрозе, в предменструальный период, при аутоиммунной тромбоцитопении, хроническом миелолейкозе, миелофиброзе, эритремии.

Абсолютный лимфоцитоз наблюдается у детей до 4 лет как физиологическое состояние. У взрослых увеличение числа лимфоцитов наблюдается при инфекционных заболеваниях вирусной этиологии, при хроническом лейкозе.

Лимфопения обнаруживается при лучевой болезни, СПИДе, хроническом алейкемическом миелолейкозе.

Моноцитопения - при тяжелых гипертоксических формах брюшного тифа и других инфекционных заболеваниях и является одним из признаков нарушения процессов регенерации.

Моноцитоз - при ревматизме, особенно в период обострения, бруцеллезе, сифилисе, туберкулезе, инфекционном мононуклеозе, может наблюдаться у новорожденных детей.

Появление в периферической крови плазматических клеток свидетельствует о напряженности иммунного процесса, например при детских инфекциях (корь, краснуха, паротит, инфекционный мононуклеоз), у взрослых - при ОРВИ, гриппе, лучевой болезни, лейкозах, гепатите.

Более подробно оценить клеточный состав можно при дополнительных исследованиях, и, прежде всего, используя методы проточной лазерной цитометрии. Это технология быстрого измерения различных характеристик клеток или их органелл. Клеточная суспензия, предварительно меченная флуоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями, подается к потоковому элементу. Клетки идут одна за другой, где в проточной ячейке их пересекает лазерный луч, под действием которого окрашенные клетки флуоресцируют. Далее через оптическую систему излучение попадает на регистрирующее устройство, где в дальнейшем обрабатывается. С помощью проточной цитометрии можно определить размеры клетки, соотношение ядра и цитоплазмы, степень асимметричности и интенсивность флуоресценции. Допускаются проведения окрашивания до десяти меток на одной клетке. При исследовании допустима оценка свойств от нескольких десятков до нескольких миллионов клеток.

Область применения проточной цитометрии весьма разнообразна. Помимо морфологических характеристик клеток с помощью моноклональных антител можно достоверно определять популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов, выявлять стадию дифференцировки и активации клеток, оценивать уровень функциональной активности лимфоцитов, определять внутриклеточные и секретируемые цитокины, проводить исследования фагоцитоза, анализировать клеточный цикл, оценивать апоптоз и пролиферацию. Основные популяции лимфоцитов периферической крови здоровых лиц представлены в табл 3.2. Эти показатели можно считать нормативными при проведении иммунологических исследований.

Т а б л и ц а 3.2

Интервалы распределения основных и малых популяций лимфоцитов в периферической крови практически здоровых лиц ___________________ [Хайдуков С.В. и др., 2009]__________________ bgcolor=white>NK-клетки (CD3-CD16+CD56+CD45+)
Популяции и субпопуляции лимфоцитов Содержание
Относительное, % Абсолютное,

х109/л

В-клетки (CD3 -CD19+HLA-DR+CD4 5+) 7,0 - 17,0 0,111 - 0,376
В1-клетки (CD 19+CD5+CD27-CD45+) 0,5 -2,1 0,022 - 0,115
В2-клетки (CD 19+CD5-CD27-CD45+) 6,5 - 14,9 0,081 - 0,323
В-клетки памяти (CD19+CD5-CD27+CD45+) 1,8 - 6,8 0,012 - 0,040
8,0 - 18,0 0,123 - 0,369
NK-клетки цитолитические (CD3- CD 16+CD56dimCD45+) 0,2 - 1,0 0,003 - 0,022
NK-клетки цитокин-продуцирующие (CD3-CD16- CD56brightCD45+) 7,8 - 17,0 0,120 - 0,347
ТИК-клетки (CD 16-CD56+CD3+CD45+) 0,5 - 6,0 0,007 - 0,165
Т-клетки (CD3+CD19-CD45+) 61,0 - 85,0 0,946 - 2,079
Т-хелперы (CD3+CD4+CD8-CD45+) 35,0 - 55,0 0,576 - 1,336
Т-цитотоксические (CD3+CD8+CD4-CD45+) 19,0 - 35,0 0,372 - 0,974
Т-хелперы активированные / памяти (CD4+CD45R0+CD45RA±CD45+) 5,0 - 25,0 0,068 - 0,702
Т-хелперы нативные (CD4+CD45RA+CD45R0-CD45+) 20,0 - 40,0 0,272 - 1,123
Т-лимфоциты активированные (CD3+HLA- DR+CD25+CD45+) 0,5 - 6,0 0,007 - 0,165
Регуляторные Т-лимфоциты (CD4+CD25brightCD127-CD45+) 1,6 - 5,8 0,009 - 0,078
Индекс соотношения (Т-хелперы / Т- цитотоксические) 1,5 - 2,6


Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета (недостаточность клеточно- эффекторного звена иммунитета). Встречается довольно часто при различных инфекциях, неспецифических воспалительных процессах, злокаче-

ственных опухолях, в постоперационный период, при инфаркте и т.д. Повышение числа Т-лимфоцитов в динамике заболевания - клинически благоприятный признак. Полное завершение болезни обычно сопровождается и нормализацией количества Т-лимфоцитов.

Увеличение абсолютного числа CD4+-лимфоцитов свидетельствует о стимуляции иммунной системы на какой-либо антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов. Однако необходимо иметь в виду, что их увеличение - чаще всего не что иное, как нормальная физиологическая реакция на антиген, что мы и наблюдаем при специфических и неспецифических инфекционных заболеваниях. Пролиферация CD4+T- лимфоцитов продолжается 3-5 сут после активации. Она обеспечивает умножение численности клеток в клонах, вовлекаемых в иммунный ответ - пролиферативную экспансию клонов. Т-клетки проходят 6-8 делений, что обеспечивает увеличение их числа примерно в 100-200 раз. Так, если исходную численность Т-клеток в клоне можно оценить у человека примерно в 2^10 (исходя из оценки общего числа Т-хелперов - в 7x10 и

п

возможного числа клонов - в 3x10 ), то после пролиферации их число может превысить 106. Это обеспечивает должную эффективность иммунного ответа, поскольку формирование активных Т-хелперов необходимо для успешной реализации практически всех его ветвей. Снижение числа Т- хелперов свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета. Особенно наглядно это определяется при ВИЧ-инфекции.

Повышение количества цитотоксических Т-лимфоцитов определяется практически при всех вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Относительное увеличение числа CD8+-клеток обычно обусловлено уменьшением количества Т-хелперов, хотя такую закономерность наблюдают не всегда. Это связано с тем, что цитотоксические Т-лимфоциты синтезируют ИФН-у, который угнетает пролиферацию T^-клеток, и с тем, что ранее CD8+-лимфоциты расценивались как Т-супрессоры. Уменьшение количества цитотоксических Т-лимфоцитов служит подтверждением недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета, что особенно важно при лечении хронических вирусных инфекций (вирусные гепатиты, герпес и пр.).

Количество В-лимфоцитов в периферической крови определяется с помощью CD^-маркера, который присутствует на всех В-клетках периферической крови, но отсутствует на плазматических клетках.

NK-лимфоциты с диагностической точки зрения имеют два важных CD-маркера - 16 и 56. Общее количество их в крови составляет: CD16+- клеток - 6-26 %, CD56+-клеток - 7-31% (0,09-0,6x10%). Снижение количества этих клеток - патогномоничный признак клеточно-эффекторного иммунодефицита, обусловленный тяжестью течения онкологических и вирусных инфекций, наблюдается и при приеме иммунодепрессантов. Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, т.е. является патогномоничным признаком клеточноопосредованной цитотоксичности.

На сегодняшний день теряет свой клинический смысл, так называемый ранее регуляторный (дифференцировочный) индекс - соотношение CD4+- и CD8+-лимфоцитов. Считается, что значение этого индекса ниже 1,0 соответствует иммунодефициту, более 2,5 - гиперактивности. С современных позиций интерпретировать этот показатель таким образом в настоящее время будет неправильно. Более информативным для таких выводов служит абсолютное число субпопуляций Т-лимфоцитов и маркеры активации.

Проявлением активации служит экспрессия на клетках различных маркеров активации. Так, на Т-лимфоцитах после действия стимуляции уже через 2-3 ч на поверхности появляется CD69 - самый ранний активационный антиген, частично мобилизуемый из внутриклеточных депо, а частично экспрессируемый de novo. Его экспрессия продолжается немногим более суток. Вскоре после CD69 на поверхности клетки появляется другой ранний маркер активации - CD25. Следующие проявления активации наблюдают через сутки после действия стимулятора, когда экспрессируется молекула рецептора для трансферрина (CD71). В последующие дни (3-6 сут) экспрессируются молекулы МНС-II, относимые к поздним маркерам активации Т-клеток, а затем - интегрины, обозначаемые как очень поздние активационные антигены VLA (Very late activation antigens), и секретиру- ются хемокины. Эти поздние проявления активации клеток совмещаются с пролиферативным процессом.

О функциональном состоянии Т-лимфоцитов свидетельствует количество клеток, экспрессирующих рецепторов к ИЛ-2 (CD25+-лимфоциты). В норме в крови их относительное число составляет 13-24 %. При гиперреактивных синдромах количество этих клеток возрастает, при иммунодефицитах - снижается. Показателем гиперреактивности иммунитета является также количество лимфоцитов, несущих два рецептора - CD3 и HLA- DR. В норме их должно быть не более 12 %.

В настоящее время типируются и другие маркеры, их сейчас насчитывается около 263 разновидностей. Особенно это важно в онкогематологии для уточнения диагноза.

Помимо определения количественного состава клеток иммунной системы очень важно дать качественную характеристику их функциональной активности. Благодаря применяемой в последнее время многоцветной проточной цитометрии, по наличию тех или иных рецепторов можно оценить функциональную активность клеток. С клинической точки зрения наиболее важны следующие рецепторы:

CD5 - молекула адгезии, регулирует активацию клеток. Определяется на Т-лимфоцитах, тимоцитах, В1-клоне В-клеток;

CD11b - относится к наиболее важным для миграции клеток инте- гринам, которые определяют активность фагоцитоза, клеточной цитотоксичности, хемотаксиса и клеточной активации Т-эффекторов, NK-клеток, макрофагов и гранулоцитов;

CD16 - является рецептором Fc-фрагмента IgG, опосредует фагоцитоз и антителозависимую клеточную цитотоксичность, при его активации усиливается цитотоксичность NK-клеток, стимулируется секреция интерферона и фактора некроза опухоли;

CD23 - экспрессируется на активированных В клетках, макрофагах, клетках тимического эпителия, эозинофилах, тромбоцитах. Показатель активности В-клеток.

CD25 - a-цепь рецептора ИЛ2. Экспрессируется на различных типах клеток периферической крови: CD4+-, CD8+-, NK-лимфоцитах, NKT- клетках, В-лимфоцитах, моноцитах. Маркер ранней активации Т- лимфоцитов. Повышение их количества, также как и общей популяции CD25-позитивных лимфоцитов, может свидетельствовать о воспалительном процессе любой природы (инфекционный, аутоиммунный);

CD27 - дополнительный маркер В2-лимфоцитов. Указывает на переход В-лимфоцитов из наивных клеток в клетки памяти;

CD28 - экспрессируется на большинстве активированных Т- лимфоцитах, NK-клетках и плазматических клетках. Необходим как ко- стимулирующий фактор для индукции иммунного ответа (пролиферации и активации клеток);

CD38 - циклическая АДФ-рибозилгидролаза, находится на поверхности лимфоцитов, обеспечивает адгезию, передачу сигнала, является так же маркером активации клеток (метаболический маркер). Понижается при ВИЧ-инфекции, лейкемии, миеломе, солидных опухолях, диабете II типа;

CD50 - межклеточная молекулы адгезии (ICAM-3), помимо этого является мощной сигнальной молекулой. Представлена на всех лейкоцитах, эндотелиальных и дендритных клетках. Обеспечивает костимулятор- ные сигналы для Т-клеток и регулирует адгезию клеток путем взаимодействия с интегринами. Показано снижение количества CD50+-клеток при опухолевых заболеваниях;

CD57 - экспрессируется на субпопуляциях 15-20% мононуклеарных клеток периферической крови, у 60% NK- и Т-клеток. Повышение показателей определяется у онкологических больных, больных после трансплантации, у пациентов с ВИЧ, а также с ревматоидным артритом и синдромом Фелти. Снижение патогномонично при хронизации болезни Лайма;

CD62L - представитель семейства молекул клеточной адгезии (L- селектин), находящийся на клеточной поверхности лейкоцитов (T- и NK- клетки, моноциты, гранулоциты), обеспечивает транслокацию лейкоцитов из крови в лимфоидную ткань, где они взаимодействуют с антигеном;

CD64 - посредник антителозависимой клеточной цитотоксичности (функциональный маркер);

CD158а - важный функциональный маркер NK-активности;

HLA-DR - экспрессируется различными клетками периферической крови. Определяется на всех В-лимфоцитах и моноцитах, на активированных Т-лимфоцитах (маркер поздней активации). Уровень экспрессии HLADR-рецептора на моноцитах менее 50 % является неблагоприятным пато- гномоничным признаком развития тяжелой бактериальной инфекции (сепсис, перитонит).

Для характеристики клеточного звена иммунной системы является важно определение концентрации цитокинов. Их идентификация в ряде случаев позволит более точно установить диагноз и механизм иммунного нарушения. Большое значение имеет определение таких провоспалительных цитокинов, как ФНО-а и -в, ИЛ-1 и ИФН-у, особенно в этиопатогенезе различных острых и хронических воспалительных процессов как инфекционной, так и аутоиммунной природы. Их повышенное образование - главная причина септического шока. При сепсисе уровень ФНО в крови может достигать 1 нг/мл. Накапливаются данные о роли провоспалительных цитокинов в этиопатогенезе неспецифического язвенного колита, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, инсулинзависимого диабета и др. Существенным является их определение у больных с соответствующим врожденным иммунодефицитом. И если раньше тесты на определение цитокинов были полезны только в научно-исследовательских целях, в настоящее время они становятся важными показателями для выявления течения заболевания и тактики лечения (особенно при применении методов цитокинотерапии).

Таким образом, лабораторное исследование состояния клеточного звена иммунной системы позволяет уточнить уровень нарушения иммунитета и в последующем проводить эффективную иммуноактивную терапию.

<< | >>
Источник: Савченко А.А.. Основы клинической иммунометаболомики . Новосибирск: Наука 2012. 2012
Помощь с написанием учебных работ

Еще по теме Оценка показателей клеточного иммунитета:

  1. Характеристика отдельных показателей клеточного звена иммунитета
  2. Оценка показателей гуморального иммунитета
  3. Клеточный иммунитет.
  4. Характеристика отдельных показателей гуморального звена иммунитета
  5. Оценка антропометрических показателей
  6. Оценка достоверности статистических показателей
  7. Принципы оценки физического развития . Антропометрические показатели
  8. Принципы оценки показателя двойного произведения
  9. Основные показатели здоровья населения России. Их медико-социальная оценка
  10. Использование исходных статистических показателей при оценке физического развития населения
  11. Общая заболеваемость. Основные критерии и показатели. Их медико-социальная оценка
  12. Реферат. Иммунитет. Методы повышения и укрепления иммунитета. Причины иммунодефицита человека2017, 2017
  13. Использование метода стандартизации при оценке здоровья населения и показателей работы учреждений здравоохранения
  14. Методы изучения корреляционных связей при оценке показателей здоровья и факторов окружающей среды
  15. Заболеваемость с временной утратой трудоспособности. Учетно-отчетная документация и оценка показателей. Кратность заболеваний. Индекс здоровья