<<
>>

Подавление глюкокортикоидами фосфолипазы А2 в перфорируемом легком морских свинок

Перфузируемые легкие морских свинок наряду с множеством других систем биологического определения уже многие годы остаются излюбленным инструментом изучения образования и выделения простагландинов (рис.

106). Идея метода определения крайне проста. Оксигенированный раствор Кребса при температуре 37°С перфузируется со скоростью 5-10 мл/мин через легочную артерию изолированного легкого морских свинок. Содержимое легочных вен направляется на ткани, выбранные для биологической оценки. Для определения простагландиновых эндоперекисей пред-

Рис. 106. Экспериментальная установка для перфузии изолированных легких морских свинок.

Раствор Кребса направляется насосом через канюлю в легочной артерии. Рилизинг-фактор (РФ) или арахидоновая кислота (АК) может вводиться в канюлю, что вызывает выделение простагландинов.

почтение обычно отдается полоскам аорты кроликов, полоскам желудка крыс, толстой кишке крыс, трахее морских свинок и прямой кишке цыплят.

Специфичность тканей к про- стагландиновым метаболитам можно повысить введением в венозный отток антагонистов других веществ, вызывающих сокращение гладких мышц.

В 1976 г. этот метод был использован для определения активности рилизинг-фактора, вещества, вызывающего сокращение аорты кролика (ВСАК-РФ, или просто РФ),- низкомолекулярной части экстракта, полученного при перфузии легких, стимулированных антигеном. Как показано на рис. 106, введение в легочную артерию РФ приводит к выделению легкими веществ, вызывающих сокращение гладких мышц, которые идентифицируются различными биологическими и другими методами как смесь простагландиновых эндоперекисей и тромбоксана А2. Индометацин и другие аспириноподобные вещества подавляют образование этих веществ.

Но при изучении ингибиторной активности препаратов других типов обнаружено, что противовоспалительный стероид дексаметазон предупреждает действие РФ, но не подавляет превращение легкими арахидоновой кислоты в простагландино-вые продукты (рис. 107).

Отсутствие влияния дексаметазона на превращение арахидоновой кислоты легкими чет

ко свидетельствует об отсутствии ингибиторного действия препарата на циклооксигеназу. При исследовании других стероидов вскоре было установлено, что почти все противовоспалительные глюкокортикоиды эффективны в отношении РФ-индуцированного выделения, а также в отношении выделения, вызванного гистамином и 5-окситриптамином. Более того, их ранжирование по активности в отношении РФ совпадало с ранжированием по противовоспалительной активности. Половые гормоны и альдостерон в данной системе не активны.

В отличие от ацетилсалициловой кислоты или индометацина при действии стероидов на перфузируемые легкие всегда наблюдается латентный период 15-30 мин.

Как и где действуют стероиды? Если арахидоновая кислота вводится в легочную артерию перфузируемого легкого морских свинок, она немедленно переходит в оксикислоты и продукты превращения простагландиновых эндоперекисей. Из этого был сделан вывод о том, что доступность субстрата (арахидоновой кислоты) является важным фактором, ограничивающим скорость образования простагландинов при использовании данного метода. В этом случае высвобождающие вещества (такие как РФ) действуют, выделяя субстрат из внутриклеточных депо. Эту гипотезу проверили, измерив выделение простагландинов

Рис. 107. Определение биологической активности эффлуента перфузируемых легких морской свинки с помощью полоски аорты (ПА) кролика показывает превращение арахидоновой кислоты (АК) в продукты простагландинов, обладающих контрактильной активностью по отношению к гладким мышцам, и образование этих продуктов после введения ФРСАО-ЗФ (РФ). Действие РФ дозозависимо блокируется дексаметазоном, вводимым в легочную артерию.

На нижней гистограмме показан стандартный способ графического отображения полученной биологической оценки в виде отношения между реакциями на РФ и АК (этот метод используется дальше по тексту).

легкими после введения различных веществ. В каждом случае введение РФ вызывало выделение арахидоновой кислоты. При введении в перфузат стероиды блокировали этот эффект, но через 30-40 мин после прекращения ин-фузии стероидов он восстанавливался.

Вполне выроятно, что противовоспалительные стероиды каким-то образом предупреждают выделение субстрата из внутриклеточного липидного депо. Но из какого? В селезенке и тромбоцитах большая часть арахидоновой кислоты, используемой для биосинтеза простагландинов, относится к фосфатид-ной фракции. Концептуальным достижением в признании фракции фосфатидов в качестве источника арахидоната является то, что это позволяет легко объяснить способность множества событий, связанных с мембраной, запускать образование простагландинов. Если клеточным источником арахидоната является пул фосфатидов, то из этого следует, что фосфолипаза А2 выполняет важную роль. В конкретной ситуации в отношении арахидоновой кислоты, которая в основном этери- фицируется в позиции 2', фосфолипаза А2 является гидролитическим ферментом.

Стимулируют ли фосфолипазу вещества, выделяющие простагландины? И если это так, то является ли данный ферментативный этап чувствительным к стероидам? Для ответа на эти вопросы был использован метод определения фосфолипазной активности в перфузируемых легких. Этот метод зависит от метаболизма специфических меченых фосфатидов

в легких. Фоновая фосфолипазная активность легких блокируется рядом препаратов, включая мепакрин (известный ингибитор фосфолипазы); ацетилсалициловая кислота и индоме- тацин практически неэффективны против этого фермента. Гл юкокортикоиды - бетаметазон, дексаметазон и гидрокортизон - проявляют себя как очень активные ингибиторы в отличие от минералокортикоида альдостерона.

Стероиды в отличие от мепакрина не влияют на активность фосфолипазы А2 в бесклеточных гомогенатах, причем подавление отличается от такового, вызываемого нестероидами, и по временным параметрам.

На рис. 108 представлены результаты эксперимента, в котором гидролиз фосфатидов измеряли каждые 10 мин до начала, во время и после инфузии дексаметазона. Перед инфузией стероидов фоновый гидролиз возрастал, а вскоре после добавления стероидов гидролиз стал замедляться и спустя 50 мин полностью прекратился. После прекращения инфузии скорость гидролиза начала возрастать и достигла контрольного уровня через 40- 50 мин.

Фоновая фосфолипазная активность может стимулироваться или подавляться. Активация фермента и фонового гидролиза осуществляется различными веществами. Стимулирующая фосфолипазу активность гистамина, РФ и антигена дозовозависимо блокируется мепакри- ном и стероидами.

Показано, что противовоспалительные стероиды отменяют выделение тромбоксанов за счет предупреждения мобилизации арахидоно-

вой кислоты, вторичной по отношению к активации фосфолипазы. Как это достигается? И почему стероиды действуют только на интактные клетки?

<< | >>
Источник: Коллектив авторов. Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ./Под ред. Р84 М.М. Дейла, Дж. К. Формена.-М.: Медицина,1998. 1998

Еще по теме Подавление глюкокортикоидами фосфолипазы А2 в перфорируемом легком морских свинок:

  1. Индукция синтеза глюкокортикоидами белкового ингибитора фосфолипазы А2
  2. Уровни подавления воспаления глюкокортикоидами
  3. Подавление мышечного потенциала
  4. Подавление пролиферации
  5. Опасность длительного применения глюкокортикоидов
  6. Влияние глюкокортикоидов на системы организма
  7. Аспириноподобное действие глюкокортикоидов
  8. Внутриклеточные рецепторы глюкокортикоидов
  9. ГЛЮКОКОРТИКОИДЫ
  10. Противовоспалительное действие глюкокортикоидов
  11. Отдаленное влияние на воспалительный процесс подавления циклооксигеназы НСПВП
  12. Влияние глюкокортикоидов на обменные процессы и его связь с побочными эффектами
  13. Исследование механизма действия хромогликата in vitro. Подавление выделения гистамина тучными клетками
  14. Отварная морская капуста