<<
>>

Метод DHPLC

Метод DHPLC предложен в 1995 году [635], позволяет в течение 2-3 минут определять однонуклеотидные замены, делеции и инсерции в амплификатах размерами до 1,5 т. п. о. Чувствительность и специфичность метода составляют около 95 %.

Метод представляет собой модифицированный вариант метода гетеродуплексного анализа с последующим автоматическим учетом результатов при помощи жидкостного хроматографа. Согласно методу DHPLC-продукты ПЦР исследуемого фрагмента ДНК подвергаются частичной денатурации в растворе с контрольными образцами того же фрагмента в соотношении 1 : 1 путем нагревания смеси до +95 °С с последующим медленным охлаждением (ренатурацией). При отсутствии мутаций в изучаемом фрагменте формируется только один тип гомодуплексов, но при наличии мутаций формируется несколько типов гетеродуплексов и гомодуплексов (рис. 4.6). Возникающие гетеродуплексы значительно менее устойчивы к температурным воздействиям, чем гомодуплексы. Эти отличия и можно уловить с помощью жидкостной хроматографии.
Метод позволяет в автоматическом режиме улавливать наличие некомплементарных (неспаренных) сайтов между опытными и контрольными образцами ДНК. Предварительный подбор оптимальных температур плавления гомо- и гетеродуплексов резко повышает чувствительность метода DHPLC по сравнению с SSCP методом (см. выше) или исходным методом гетеродуплексного анализа (см. выше) [133, 278, 429, 566].

Метод DHPLC уже широко применяется для генотипирования однонуклеотидных замен (SNP), при первичном анализе полиморфных

CG CG
CG CG
AT GC
GC GC
AT AT
\

Денатурац ия и отжиг

\

Гетеро- и гомо- дуплексы

сайтов в генах-кандидатах, ассоциированных с МФЗ, при изучении молекулярных маркеров и мутаций в Y-хромосоме, для картирования генов с помощью типирования маркерных SNP.

<< | >>
Источник: Баранов В.С.. Генетический паспорт — основа индивидуальной и предиктивной медицины / Под ред. В. С. Баранова. — СПб.: Изд-во Н-Л,2009. — 528 с.: ил.. 2009

Еще по теме Метод DHPLC:

  1. Основные параклинические методы, используемые в системе медицинского обследования спортсменов. Электрофизиологические методы
  2. Традиційні методи контрацепції. Бар’єрні методи контрацепції
  3. Методи підготовки вагітних до родів. Медикаментозні методи підготовки вагітних до родів
  4. МЕТОД ЛАКТАЦІЙНОЇ АМЕНОРЕЇ
  5. Функциональные методы
  6. Природні методи контрацепції
  7. ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
  8. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
  9. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
  10. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ