<<
>>

РЕАГИНЫ И ИММУНОГЛОБУЛИНЫ Е

Реагины человека представляют собой IgE, открытый Isliizaka в 1966 г. Johansson (1971) описал этот глобулин под названием ND белка в крови Сольных миеломной болезнью. Содержание IgE у здоровых людей очень незначительно (до I-3 мкг/мл). При аллергических заболеваниях, глистных инвазиях и миеломной болезни содержание IgE в сыворотке крови увеличивается во много (от 4 до 30) раз. Относительная молекулярная масса IgE 190 000—200 000. Обработка IgE меркаптаном показывает, что он содержит 20% белковых легких Я-цепей и 80% тяжелых цепей, содержащих углеводы.

Тяжелые цепи IgE обозначаются как е-цепи. Фракции IgE, содержащие тяжелые е-цепи, имеют относительную молекулярную массу 72 500 ±2400. Они не имеют общих антигенных детермипаит с тяжелыми цепями а, у, ц и б других видов глобулинов (IgA, IgG, IgM, IgD). Относительная молекулярная масса легких цепей — 22 600 [11].

Глобулин содержит 30% углеводов. Константа седиментации 8S. IgE высаливается в нейтральной среде сульфатом аммония (pH 7) при 0,4 насыщения или сульфатом натрия в количестве 18 г на 100 мл сыворотки (pH 7,5) при 25°С. В электрическом поле белок мигрирует с yi- и '(3-фракциями глобулинов сыворотки крови при pH 8,6. Белок достаточно стабилен и при хроматографии на АЭДЭ отделяется от других иммуноглобулинов.

Данные о составе и свойствах глобулина Е в сравнении с другими глобулинами в сыворотке крови человека приводятся в табл. 23.

Таблица 23

Некоторые показатели основных классов иммуноглобулина

Пмдоуио-

глибулин

Молекулирван масса Концентрация в плазме крони человека Константа седи- мен raprais°aoW Типы пептидных цепей тяжелые | легкие
G 150 000 9 мг/мл 7S 7
м 900 000 0,75 мг/мл 19S Iі-
А 165 000 1 мг/мл 7S а %
D 160 000 0,03 мг/мл 7S 0 или
Е 196 000 0,003 мг/мл 8S £ X

Иммупоглобулип Е распадается па фрагменты под влиянием протеолитических ферментов (схема 8).

Папаин расщепляет иммуноглобулин Е, как и другие иммуноглобулины, па 3 фрагмента: 2 фрагмента Fab и 1 фрагмент Fc. Относительно других иммуноглобулинов иммуноглобулин Е более стоек и через час переваривания 35% белка остается нераегцеплеппым. Под влияпием пепсина 75% IgE расщепляется па фрагменты с копстаптой седиментации 6,2. Они имеют молекулярную массу 150 000, мигрируют в области у і, содержат аптцгепныо детерминанты е0 и Я и части фрагментов Fc и Fc1.

Они обозначаются как фрагменты F(ab1)2. Под влиянием нагревания до 56°С в течение 2—4 ч глобулип IgE теряет свои свойства и не реагирует с антигеном. Лишь фрагмент Fc1 не инактивируется в этих условиях. Свойства фрагментов глобулина, полученных под влиянием протеолитических ферментов, представлены в табл. 24.

Реагины относятся к лопроципитирующим антителам, т. е. не дают с антигеном видимого осадка в жидкой среде или в желе. Это создает некоторые трудности определения их содержания в сыворотке крови. В настоящее время предложено и используется много методов определения содержания реагинов в сыворотке крови. Все эти методы в конечном счете основаны на том, что комплекс реагин + аллерген соединяется с субстратом, который можно заметить радиологическими измерениями (ауторадиография, радиосорбция, флюоресценция и т. д.). Существуют методы

Пепсин
1

Папаин і

rssl rsi | 1 J j

j—SS—| |—.SS—| |—SS—| j—SS*—| j—SS—| j—SS j

1—ss—i j—ss—jss
£0 Є;. Є2
1 П ТГ 1—ss—1 1—SS—1 —SS— —SS—1 —SS— —SS—.
1 Fc,

4 ................................................................. ............................... S

11 1 53__ 1 1—SS—‘

Fae

Fc
Схема 8

СТРОЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНА Е (РЕАГИНА).

Примечание, во, е2 — фрагменты тяжелых цепей иммуноглобулина; вертикальные стрелки — места расщепления тяжелых цепей иапапиом я не пени ом; Fab, Fc, Fci — фрагменты тяжелых цепей иммуноглобулинов.

определения общего IgE и иммуноглобулина против какого-либо отдельного аллергена (специфические IgE). Метод определения общего IgE, разработанный Aufongo с соавт. в Марселе, основан на принципе простой

Таблица 24

Некоторые свойства фрагментов иммуноглобулина Е

Ферменты Продукты Молекулярная Электро- Аігтигспгш структура Константа

седимен-

Tai;HHSojiiW

гидролиза масса форез *0 bgcolor=white>F(ab)2 103 ooo -f"' **j-
Fc" , 40 000 _ + —— 6,7 S

радиальной иммунодиффузии Манчиии. Иммунную анти-IgE человеческую сыворотку барана смешивают с агаром и разливают на пластинки с расчетом получить слой в 1 мл толщиной. В агаре делают лупки диаметром 3 мм, в которые разливают стандартные разведения IgE от 1:2 до 1: 256.

Подобным же образом и в таких же разведениях разливают сыворотку крови исследуемого больного. Пластины с агаром выдерживают во влажной камере при температуре 37°С два дня, а потом отмывают фосфатным буфером pH 7,2 и 0,15 М NaCl. Потом их помещают в раствор, содержащий иммунную сыворотку кролика против белков сыворотки ба-

Рис. 25. Схематичеіское изображение присоединения гемолизина к клетке и комплементу и присоединения реагина к клетке и аллергену.

Длинные линии — тяжелые цепи гемолизина или реагина; короткие линии — легкие цепи этих же антител.

рана. Иммунная сыворотка помечена 1251. Через 12 ч пластины отмывают раствором фосфата при 4°С и далее два дня — дистиллированной водой. Далее их высушивают при комнатной температуре в течение двух дней и ауторадиографируют на рентгенопленке. Диаметр полученных зон диффузии учитывают по методу Манчиии. Существуют варианты метода, когда вместо обработки комплекса антисыворотки барана и IgE аитиба- раиьей сывороткой кролика последнюю метят не 1251, а флюоресцирующим изотиоцианатом. Интенсивность флюоресценции отражает степепь содержания IgE в исследуемой сыворотке. Содержание IgE вычисляют по номограмме.

Как уже указывалось, важнейшим биологическим свойством реагипов, отличающим их от других видов антител, является способность фиксироваться на конче и других тканях. Установлено, что каждые две молекулы реагина, фиксируясь па ткани, присоединяют одну молекулу аллергена (рис. 25),

Реагин как антитело выполняет при этом роль того же соединительного аппарата между клеткой и аллергеном, которую играет гемолизин или цитотоксин, присоединяя к клетке комплемент (рис. 26). Можно сказать, применяя старую терминологию Эрлиха, что реагин является подобием амбоцептора меніду клеткой и,аллергеном.

В то же время следует подчеркнуть существенное различие в характере связей в системах клетка — антитело — комплемент и клетка — апти- тело — аллерген. В первом случае антитело (гемолизип) фиксируется па клетке с помощью детерминант, расположенных как в тяжелых, так и в легких цепях своей молекулы, а с комплементом соединяется с помощью тяжелых цепей. Реагины присоединяются па клетке с помощью только тяжелых цепей (Fc-фрагмопты) (Stanwortli, 1971), а аллерген — с помощью детерминант, расположенных и связанных с особенностями структуры как тяжелых, так и легких полипептидных цепей (Fab-фрагменты).

Рис. 26. Схематическое изображение фиксации цитотоксинов и реагипоїв па клетке.

Кроме клеток кожи, реагины могут присоединяться к клеткам гладкомышечных органов (бронхи, кишечпик, матка и др.), соединительной ткани (тучные ішстки, базофилы крови, лимфоциты), эндотелия капилляров, к тканям легких и, вероятно, к нервным клеткам. Различные клетки содержат от 30 000 до 90 000 рецепторов для IgE (К. Ishizaka, Т. Ishizaka, 1974,).

Таблица 25

Аллергические реакции тканей человека и обезьяны (по Arbesman, 1964)

Mi сыворотки больных полли- лозом (амброзия) Сенсибилизированные ткани
легкие обезьяны кишка обезьяны реакция Лрауснит- ца—Кюстнера (человек)
1 160 10 000 1 500
2 40 8 000 800
3 40 3 000 400
4 20 300 400
5

Контроль

20 500 400
(здоровые) 2,5 100 10

Примечание. Цифры означают величины, обратные титрам реагинов в исследуемых сыворотках.

Рис. 27. Титры (—Lgio) реагип- пой сыворотки по реакции изолированной кишки Macacus rhesus (а) и по реакции Прауснитца — Кюстнера (б) (объяснение в тексте) .

Как гомоцитотропные антитела реагины фиксируются прежде всего на тканях того животного, которое выработало их в ответ на воздействие аллергена. Однако реагины человека могут соединяться и с тканями животных. Особое внимание исследователей привлекла способность реагинов человека фиксироваться на изолированной подвздошной кишке и ткани легкого обезьяны (Macacus rhesus) и сенсибилизировать их. Табл. 25 показывает сравнительную активность реагинов человека для тканей макаки и в реакции Прауснитца — Кюстнера.

В нашей лаборатории Т. А. Авдеева использовала изолированную кишку макаки для обнаружения реагинов в крови больных поллииозом. Автор показала высокую чувствительность этого теста для определения реагинов у человека вне оргапизма. По данным автора, чувствительность кишки обезъяпы к реагинам в 1000 раз больше таковой, определяемой по реакции Прауснитца — Кюстнера (рис. 27).

В ПИАЛ АМН СССР изучены биологические свойства реагинов и условия их фиксации в коже человека. Одновременно исследовались оптимальные сроки и продолжительность сенсибилизации кожи реагинами в реакции пассивного переноса по Прауснитцу — Кюстперу.

Сыворотку крови больных поллииозом инкубировали с измельченной кожей донора (здорового человека) при 37°С в течение 4—5 ч, затем центрифугировали, и надосадочиую жидкость в количестве 0,2 мл вводили внутрикожно реципиенту, не имеющему в анамнезе аллергических заболеваний. В качестве контроля использовали аналогичное разведение реа- гинной сыворотки. Разрешающую дозу аллергена вводили в место пас-

сивіюй сенсибилизации через 24—48 ч и читали реакцию спустя 15 мин, измеряя площадь волдыря по наибольшему и наименьшему его диаметрам. О степени фиксации антител в коже судили по уменьшению размера волдыря после ипкубации реагипиой сыворотки с измельченной кожей по сравнению с контролем. Припимая за 100% размер волдыря, полученного при пассивном переносе атопической сыворотки, и определив, какой процент составляет площадь волдыря после инкубации сыворотки с измель-

Рис. 28. Уменьшение кожно-сен- с и б ши з нр у ю где й активности сыворотки, содержащей реагины, доело инкубации ее с кожей человека (in vitro), і — реакция Прауеігатца—Кгостиера е реагинной сывороткой; 2 — реакция Прауеігатца — Кюстиера с реагии- иой сывороткой после инкубации ее с кожей человека.

ченной кожей, вычисляли процент фиксации. После инкубации реагипиой сыворотки с кожей человека наблюдалось выраженное падение кожпо- сенсибилизирующей активности этой сыворотки, о чем свидетельствовало уменьшение площади волдырной реакции при пассивном переносе по Праусггатцу — Кюстнеру (рис. 28). Оказалось также, что кожа человека, полученная от разных доноров, может обладать различной способностью фиксировать in vitro кожио-сенсибилизирующие антитела.

Далее мы стремились установить, зависит ли фиксация реагинов от температуры, при которой происходит инкубация атопической сыворотки с кожей. Опыты показали, что фиксация при инкубации реагипиой сыворотки с кожей при 4°С составляла 32,5%, а при температуре ипкубации 37°С — 67,4%.

В ИИАЛ АМН ССОР изучены оптимальные сроки продолжительности сенсибилизации кожи человека в реакции пассивного переноса по Прауснитцу — Кюстнеру.

Реципиенту-волоытеру на внутренней стороне предплечья делали 6—8 сенсибилизирующих инъекций по 0,1 мл сыворотки Хфови больных с аллергией к пыльце амброзии. Сыворотку подбирали с достаточно высоким титром реагинов, чтобы в опытном разведении оиа не давала немедленной токсической (неспецифической) реакции при внутрикожном введении. Разрешающую дозу аллергена (0,03 мл) вводили в точки сенсибилизации с различным интервалом времени: через 30 мин, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 24 ч. Спустя 20 мин после введения аллергена, читали реакцию, измеряя площадь волдыря. При инъекции разрешающей дозы аллергена через 30 мин

после локальной сенсибилизации кожи реципиента в 9 из 10 опытов наблюдалась большая реакция, чем при введении аллергена в более поздние сроки. Реакция, зарегистрированная через 1—2 ч, была равна реакции, полученной через 24 ч. Очевидно, для оптимальной сенсибилизации кожи при пассивном переносе по Прауснитцу — Кюстиеру не требуется столь продолжительного периода времени (24—48 ч), как это указывается в классическом варианте методики.

В то же время нельзя установить минимальный срок пассивной сенсибилизации кожи, так как в первые 30 мин отмечается увеличение реакции.

Нам кажется возможным объяснить тот факт, что наибольшая реакция наблюдается через 30 мип после сенсибилизации, образованием растворимого комплекса (аллерген + нефиксированные реагины), который, как известно, обладает высокой биологической активностью. Дополнительное действие этого комплекса усиливает аллергическую реакцию, полученную при введении аллергена через 30 мин после сенсибилизации.

В следующей серии опытов изучали продолжительность фиксации реагинов в коже человека при пассивном переносе по Прауснитцу — Ктостне- ру. Способность длительное время сенсибилизировать кожу человека является характерной особенностью реагинов. Loveless (1941) обнаруживала реагины в колю при пассивной сенсибилизации реципиентов в течение 4 пед, a Augustin, с соавт. (1966) — на протяжении 2 нед.

Суждение о продолжительности фиксации кожио-сенсибилизирую- щих аптител при пассивном переносе базируется преимущественно на определении срока, в течение которого в ответ на введение специфического аллергена воспроизводится положительная кожная реакция. Это в значительной степени может зависеть от титра реагинов в исследуемой сыворотке. Поэтому мы использовали 50% падепие титра кожтго-сетгсиби- лизирующих аптител в реакции Праусиитца — Кюстпера как количественный показатель продолжительности сенсибилизации кожи реагинами. С этой целью после определения титра реагинов (через 24 ч после сенсибилизирующей инъекции) кожу реципиента-волоитера пассивно сенсибилизировали двукратными разведениями сыворотки начипая с разведения, равного титру. Разрешающую дозу аллергена вводили в точки сенсибилизации с различным интервалом времени: через 6, 8, 9, 10 дней.

Наши наблюдения показали, что реагиниая активность сыворотки, определяемая в реакции пассивного переноса по Прауснитцу — Кюстле- ру, исчезает из точек сенсибилизации в такие сроки, чт-о 50% падепие титра кожно-сенсибилизирующих антител происходит не ранее чем на 8—10-й день после сенсибилизирующей инъекции.

Следует указать, что сейчас начинают накапливаться факты в пользу гипотезы о гетерогенности гомоцитотропных анафилактических антител типа реагинов. Так, А. Д. Адо, А. А. Польнер и др. наблюдали, что реагины человека связаны как с IgG, так и с IgA.

У животных (мыши, крысы, кролики, морские свинки) гомоцитотроп- пые антитела встречаются в форме двух типов. Первый тип соответствует по своим свойствам реагинам человека и является глобулином IgE. Второй тип является IgG и существенно отличается по своим свойствам от реагинов человека (табл. 26).

Анафилактические антитела IgG у человека, кролика и мыши сенсибилизируют кожу морской свинки для обратной кожной анафилаксии по Овери, т. е. являются гетерологичными. Интересно, что этим свойством не обладает глобулин субкласса IgG2. Этот глобулин человека соответствует

IgG у мыши и морской свинки. Глобулины субклассов IgGi и IgGd у человека, y2aG у мыши и крысы и y2G у кролика переносят только кожную чувствительность, по но сенсибилизируют животное к анафилактическому шоку.

Следует указать, что кожио-сенсибилизирующие глобулины класса IgG образуются у человека обычно в незначительных количествах.

<< | >>
Источник: Адо А.Д.. Общая аллергология. Изд. 2-е, перераоотанное и дополненное. А. Д. АДО. М., «Медицина»,1978, с. 464 с ил.. 1978

Еще по теме РЕАГИНЫ И ИММУНОГЛОБУЛИНЫ Е:

  1. РЕАГИНЫ
  2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕАГИНОВ
  3. СЕЛЕКТИВНЫЙ ДЕФИЦИТ ИММУНОГЛОБУЛИНА А
  4. СЕКРЕТОРНЫЕ ИММУНОГЛОБУЛИНЫ
  5. СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
  6. ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ НАЗНАЧЕНИЯ ВНУТРИВЕННЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
  7. Определение иммуноглобулинов в крови
  8. ПРИЛОЖЕНИЕ № 3. СОДЕРЖАНИЕ (СРЕДНЕГЕОМЕТРИЧЕСКОЕ) ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ (г/л) ЗДОРОВЫХ ДЕТЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ
  9. АЛГОРИТМ ВЫБОРА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ (Н. А. Коровина и соавт., 2000
  10. ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ВНУТРИВЕННЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В РОССИИ (Н. А. Коровина и соавт., 2000)
  11. ГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛА
  12. ПРОФИЛАКТИКА РЕЗУС-ИММУНИЗАЦИИ У РЕЗУС-ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ЖЕНЩИН ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ ОТ РЕЗУС-ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО ПАРТНЕРА
  13. Патогенез
  14. БЛОКИРУЮЩИЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА
  15. ЛЕЧЕНИЕ
  16. Глава 4 Диагностическая значимость лабораторных тестов, используемых для оценки иммунного статуса