<<
>>

ВОПРОСЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ И КОНТРОЛЯ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГЕНОВ

Вопрос о стандартизации содержания аллергенов в различных веществах и препаратах находится в настоящее время в центре- внимания аллергологов. До сих пор нет единой принятой международной системы стандартизации аллергенов.

Основная трудность создания таковой системы заключается в том, что мир аллергенов исключительно широк и разнообразен. Химическая природа и способы действия аллергенов па- организм, а также их антигенная активность также очень разнообразны и во многих отношениях недостаточно изучены. Различают содержание, того или иного аллергенного материала (белка, пептида, гликопротеида и т. д.) на единицу массы (г, мг) исходного материала и биологическую- активность аллергена, выражаемую в кожных дозах или в способности вступить в иммунную реакцию впе организма с антителами или с клетками.

Вопросу о стандартизации аллергенов был посвящен специальный симпозиум Всесоюзной организации здравоохранения в Женеве в 1974 г..

Стандартизация аллергенов имеет много аспектов, среди которых можно*' выделить следующие:

1) выбор аллергенов,

2) унификация действующих единиц аллергенов,

3) стандартизация веществ-адъювантов,

4) методы стандартизации на больном,

5) методы стандартизации вне организма больного,

6) вопросы разведений, состава разводящей жидкости, консервантов.

Вопрос о выборе аллергена для создания стандартного реферанс-пре- нарата связан с рядом трудностей. Количество известных видов аллергенов, применяемых в практической аллергологии, исчисляется в настоящее время многими сотнями названий. Химическая природа и струїїтураї активного вещества в составе того или иного аллергена для многих видов, аллергепов пока не определена или определена недостаточно точно (пылевые аллергены, аллерегпы из насекомых, многие пищевые аллергены,, эпиаллергепы и др.). Даже для сравнительно изученных пыльцевых аллергенов до настоящего времени нет единого мнения по вопросу о главнейших действующих в аллергене веществах в составе пыльцы того или иного растения.

Применительно к бактериальным аллергенам большое значение имеет громадное разнообразие штаммов и их вариантов для; каждого вида микроба, существенно различающихся по их аллергенной и сенсибилизирующей активности. Как показали наши исследования, существенное значение имеет, например, факт паличия или отсутствия у того или иного вида микробов, населяющих бронхо-легочпый аппарат больного бронхиальной астмой, общхтх антигенных детерминант с тканями легких или бронхов (Л. Д. Адо, В. Н. Федосеева, 1971). Для пыльцевых аллергенов обнаружено наличие общих антигенных свойств у пыльцы луговых трав, общие антигены известны для пыльцы некоторых сорняков, полыни, подсолнечника и др. Общими аллергенными свойствами обладают пищевые аллергены разных видов картофеля, пшениц, ржи и т. д. Эти данные послужили основанием для приготовления многими фирмами, выпускающими аллергены, с диагностическими и лечебными целями микст-аллергенов (букеты, наборы). Они состоят из основных аллергепов. той или иной группы, содержащих общие антигенные детерминанты для разных представителей данной группы, в том числе и для не входящих в состав микстов. Так, например, микст-аллерген пыльцы луговых трав, готовят из пыльцы тимофеевки, имеющей общие антигенные детерминанты с пыльцой многих видов трав. Микст-аллерген для пылевых аллергепов. производят из пыли, обладающей наибольшей аллергенной активностью при испытании на больных и имеющей общие антигенные детерминанты с большим количеством нылей различного происхождения. Микст-аллер- гены изготавливают и выпускают из аллергенов животного происхождения, некоторых групп пищевых аллергепов и т. д. Применение микст-аллергенов сокращает число диагностических инъекций больным или число- постановок соответствующих реакций вне организма. Оно служит также хорошим ориентирующим приемом для диагностики чувствительности больных к той или иной группе аллергенов.

Количественный подход к оценке активности того или иного аллергена основывался прежде всего на определении кожной дозы, т.

е. того минимального количества аллергена, которое способно вызвать кожную реакцию определенного объема. Определение объема реакции не является до настоящего времени общепринятым и стандартизованным для всех известных аллергенов. Часто объем реакции выражается в плюсах; ирис •этом обозначение от 1 до 4 плюсов соответствует возрастающей интенсивности кожной реакции. Однако способы оценки интенсивности реакции в виде хотя бы площади возникшего воспаления на коже при применении разных аллергенов пока еще различны у разных авторов. Например, для оценки кожных реакций на бактериальную суспензию в количестве 0,1 или 0,02 мл Й. Лишка предлагает следующие обозначения (табл. 19).
Таблица 19

Оценка ножных аллергических реакций на бактериальные аллергены

Степень реакции Внешний вид реакции „немедленного*1 типа Внешний вид „поздней11 реакции
Помнит ельпая (±) Слабо выраженный Неопределенное покрасне-
Слабололожительная волдырь ние .вокруг места укола (только в пределах инфильтрата)
Хорошо выраженный Насыщенная эритема на ме-
( + ) волдырь, эритема Волдырь до 20 мм, с те инфильтрата
Положительная средней Эритема до 20 мм
степени (++) эритема
Резко положительная Волдырь 20 мм с Эритема до 20 мм или лег-
( + + + ) «ложноножками», эритема

Волдырь более 20 мм

кая геморрагия
'Очень резко положитель- Эритема более 20 мм с цент-
ная (+4-4-4-) с «ложноножками», эри- ральпой геморрагией или нус-
тема тулой

Примечание.

При дозе 0,02 мл средняя величина реакции снижается втрое.

Серьезной критике подвергается в настоящее время предложенный ранее прием стандартизации аллергенов по весовым количествам вещества (экстрагируемого сырья, например, из пыльцы растений) в аллергене. Единица Нуна выражает количество экстракта, полученного из 10-6 г •вещества аллергена. Действительно, содержание активного аллергенного материала в разных веществах, содержащих аллергены (пыли, пыльца растений, животные ткани), настолько различно, что приведение их к ■общему знаменателю через количество весовых единиц сырого, нативного, содержащего аллерген материала ие имеет никакого смысла. Сравнительные исследования аллергенов в плане содержания единиц Пуна показали бесперспективность этого приема стандартизации.

Другой прием стандартизации аллергенов по содержанию в них белка (PNU) 1 или общего количества азотсодержащих соединений (TNU) 2 также подвергается критике. Действительно, белки, содержащиеся в том или ином аллергенном материале (ткани растений, животных, микробов), часто имеют различную природу и свойства. Наряду с белками, обладающими высокой аллергенной активностью, в аллергенах могут содержаться неактивные «баластные» белки, влияющие, одпако, на величину PNU. Исследования показывают, что данные кожных проб лучше коррелируют с реакцией освобождения гистамина из тканей с содержанием глобулина Е, чем с PNU исследуемых аллергенов. Поэтому проблема стандартизации аллергенов в настоящее время в большей степени развивается по пути разработки методов иммунохимического их тестирования (PAGT- тест, либерация гистамина и др.), чем по пути использования более грубых весовых или азотометрических способов их выражения.

і PNU — см. сноску с. 57.

8 TNU — Total Nitrogen Unit-10-8 общего азота в 1 мл экстракта.

С проблемой стандартизации аллергенов теспейшим образом связапа проблема очистки аллергенов от сопутствующих им балластных биологически инертных или даже ингибирующих их активность веществ.

В Институте Пастера в Париже Guibert (1969) разработал метод стандартизации поипфекционпых аллергенов, основанный на иммунологическом принципе. У кроликов получали иммунные сыворотки по отношению к тому или иному виду аллергена. Затем при помощи реакции преципитации в агаре определяли наибольшее разведение аллергена, способное

Рис. 24. Соотношение белковых и углеводных 'компонентов в некоторых аллергенах (схема) (по Barrens, 1971).

і — семена хлопка; 2 — семена клещевины: 3 — пыльца амброзии, фракция Е; 4 —пыльца амброзии, фракция К; 5 — коропг.е молоко; (3, 10, 17 — пыльца амброзии; 7—пыльца райграсса; 8 — яичный белок; 9 — ручейник (насекомое); И—ипекакуана; 12 — перхоть лошади; 13 — томаты; 14 — перхоть человека; 15 — домашняя пыль; 16—перья; 18 — сено; 19 — аскариды; 20 — лакрица; 21—капок (ватоподобиые волокна семян тропического дерева); 22 — трихофи- тои. Косая штриховка — содержание пептидов в процентах, штриховка ромбами — содержание углеводов в процентах.

вызвать образование линий преципитаций с соответствующей антисывороткой. Метод соблазняет своей относительной простотой и кажущейся убедительностью с иммунологических позиций. Его недостатком является то, что данные реакции преципитации в желе обычно не коррелируют с активностью аллергена, определяемой по кожным пробам. Метод может быть использован в качестве одного из дополнительных приемов стандартизации аллергенов.

С проблемой стандартизации аллергенов тесно связан вопрос сравнительного изучения их химического состава и физико-химических свойств. Усилия многих исследователей в связи с этим направлены на выявление сходства и различий в химическом составе и физико-химических свойствах различных аллергенов. Относительно много сделал в этом огношшгаи Berrens (1971) для неинфекционных аллергенов (рис. 24). Установлено, что практически все неинфекционные аллергены представляют собой различные комбинации пептидов и сахаров (гексозы и пентозы). При этом в одних аллергенах преобладают пептидные составные части (пыльца амброзии, луговых трав, семена хлопка, клещевины, лошадиная перхоть и др.), а другие почти полностью состоят из углеводов (аскариды, трихо-

Т а б-л и ц а 20

Содержание амишжислот в процентах сухого вещества аллергена 1

bgcolor=white>9,6
Аминокислота Аллерген Е (амброзия) Аллерген

райграсса

Домашняя

пыль

Перо Семена

хлопка

Томат
Лизин 6,0 9,7 0,47 0,47 6,5 4,6
Гистидин 2,1 М 0,22 0, 17 3,4 0,65
Аргинип 9,7 2,5 0,33 0,45 27,5 2,5
Аскорбиновая кислота 14,8 8,0 1,06 1,38 5,2 13,3
Треонип 4,5 4,5 1,27 0,58 1,5 8,2
Серии 5,9 3,0 1,08 0,74 1,7 8,5
Глютаминовая кислота 8,0 7,0 1,73 1,99 20,5 10,7
Пронин 4,0 3,7 1,50 0,81 2,6 6,5
Глицин 4,0 2,6 1,03 1,18 3,0 10,6
Аланин 5,7 3,7 0,83 0,67 7,1 6,5
Цистеин 2,0 1,9 Следы 0,50 3,1 +
Валин 6,2 8,9 0,38 0,63 0,8 5,1
Метионин 2,4 0,7 Следы 0,32 0,6
Изолейции 5,9 3,2 0,24 0,45 0,5 5,3
Лейцин 6,2 2,9 0,36 0,69 3,4
Тирозин 1,7 2,3 0,25 0,43 1,2 3,4
Фенилаланин 4,6 3,4 0,23 0,40 1,0
Триптофан 2,9 3,2 0,6 +

1 Данные пересчитаны из работ King (1974) и других авторов.

фитон, солодковый корень, некоторые виды домашней пыли и др.). Есть аллергены примерно с одинаковым содержанием пептидных и углеводных компонентов. Попытки характеризовать неинфекционные аллергены по особенностям их аминокислотного состава не дали положительных результатов. Состав аминокислот не характеризует активность того или иного аллергена. Данные о содержании амипокислот в некоторых аллергенах приводятся в табл. 20.

Определение отношения тирозин/тринтофан также не дало пичего существенного для характеристики аллергенных свойств исследуемого материала. Значительное содержание пигментов во многих аллергенах затрудняет спектрофотометрическое исследование. Особое значение приобрело изучение содержания лизина, так как через него осуществляется связь пептидов аллергена с сахарами. Содержание несвязанного лизина (действующего «available» лизина) имеет значение для реализации процессов потемнения, известных при хранении пищевых продуктов. Эта реакция имеет также место при соединении пептидов с сахарами и, как оказалось (Berrens, 1971), является важной биохимической характеристикой активности аллергенов. Содержание свободного (не связанного с сахарами) лизина примерно соответствует общему содержанию азота в аллергенах (см. табл. 20).

Некоторые сведения о физико-химических свойствах атопических аллергенов уже приводились при описании их отдельных видов. Проблема стандартизации аллергенов выдвигает задачу поиска общего в различном и выявления особенностей каждого аллергена в отдельности. Сравнительное изучение указанных аллергенов показало, что молекулярная масса их колеблется от 5000 до 40 000. Большинство аллергенов имеет изоэлектри- ческую точку в кислой зоне (pH 2,0—5,5) и обладает быстрой электрофоретической подвижностью к аноду. Богатые белком аллергены двигаются со скоростью Р-гДобулииов сыворотки крови человека.

Константа седиментации S20, W у разных аллергенов изменяется в пределах от 1,0 до 4,0. Соли [(NEUbSCU или NaCl)] осаждают аллерген тем легче, чем меньше содержится в них углеводов. Обычно концентрация сульфата аммония 0,3—0,8 насыщения достаточна для осаждения аллергена из водного раствора.

Соединение пептида с пентозой (арабипозой) происходит через е-ами- иогруппу лизина и альдегидную группу пептозы с образованием продукта реакции в виде 1-амипо-1-деокси-2-кетозы (пентулозы), дающей полосу поглощения 280—290 им. Реакция подвижна и сопровождается образованием 1,2-эиольной или 2,3-эиедиолъпой форм, имеющих соответственно полосы поглощения 305—330 и 320—370 нм. Реакция протекает следующим образом:

Белок Белок Белок Белок Белок
|

NH

і ■bgcolor=white>—

+
Лошадиная

перхоть

34 000 10,2 13,9 Галактоза, манноза, фукоза 4,45 ± +
Домашняя

пыль

20 000— 30 000 7,5 31,1 Галактоза, глюкоза, манпоза, арабиноза, ксилоза 3,8 ±
Перья 4,5 2,7 Арабипоза, ксилоза 0,23 zb

Примечание. — ие оказывает влияния; ± слабое действие; + оказывает влия-

<< | >>
Источник: Адо А.Д.. Общая аллергология. Изд. 2-е, перераоотанное и дополненное. А. Д. АДО. М., «Медицина»,1978, с. 464 с ил.. 1978

Еще по теме ВОПРОСЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ И КОНТРОЛЯ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГЕНОВ:

  1. О возможности контроля активности липокортина фосфорилированием
  2. ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ■ Тестовые вопросы по курсу профессиональных болезней
  3. АНТИТЕЛА К ИММУННЫМ КОМПЛЕКСАМ С АЛЛЕРГЕНОМ ИЗ ПЫЛЬЦЫ РАСТЕНИЙ
  4. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ ПРОБ С АЛЛЕРГЕНАМИ И ПРОВЕДЕНИЯ СИТ
  5. Использование метода стандартизации при оценке здоровья населения и показателей работы учреждений здравоохранения
  6. ЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МОЗГА. ЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЦНС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ШОКЕ
  7. Контроль ритма или контроль частоты сердечных сокращений?
  8. Стандартизация лекарственных средств. Контрольно-разрешительная система обеспечения качества лекарственных средств
  9. Внутренняя активность
  10. Триггерная активность
  11. Биологическая активность ИЛ-1
  12. Выявление скрытой активности.
  13. Глава 2 АКТИВНОСТЬ АНТИБИОТИКОВ
  14. Ферментативная активность.
  15. активный транспорт
  16. АКТИВНОСТЬ И УСТОЙЧИВОСТЬ
  17. Прогестагенная активность ААС
  18. Дефицит активности метилтетрагидрофолатредуктазы
  19. Глава 5.БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА
  20. Триггерная активность