Определение аскорбиновой кислоты в сыворотке крови по Тильмансу

Принцип метода. Методика основана на реакции восстановления 2,6-дихлорфенолиндофенола в кислой среде в присутствии аскорбиновой кислоты в лейкоформу. При этом аскорбиновая кислота окисляется в дигидроаскорбиновую. О завершении окислительно-восстановительного процесса свидетельствует появление розового окрашивания титруемого

раствора после прибавления очередной капли 2,6-дихлорфенолиндофенола.

Реактивы:

Те же, что и для определения аскорбиновой кислоты в моче и дополнительно:

1. 0,0005 н. раствор краски Тильманса: готовят из 0,001 н. раствора 2,6- дихлорфенолиндофенола разведением дистиллированной водой в соотношении 1:1.

2. 20% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ).

Ход определения.

Берут 1 мл сыворотки крови и медленно приливают 2,5 мл 20% раствора ТХУ, встряхивая пробу, добавляют 2,5 мл дистиллированной воды, смешивают. Белки крови при этом осаждаются. Через 30 мин центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об./мин. Надосадочную жидкость сливают в пробирку Хагедорна и титруют 0,0005 н. раствором 2,6- дихлорфенолиндофенола до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 30 с.

Расчет содержания аскорбиновой кислоты в сыворотке крови ведут по формуле:

К х а х 0,088 х100 2

X - содержание аскорбиновой кислоты, мг/дл;

а - количество 0,0005 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование 1 мл сыворотки крови, мл;

К - коэффициент поправки к титру краски Тильманса;

0, 088 - количество аскорбиновой кислоты, восстанавливающее 1 мл краски Тильманса, мг;

2 - разведение краски Тильманса;

100 - расчет на 100 мл сыворотки крови.

Коэффициент для перевода концентрации аскорбиновой кислоты в сыворотке крови из мг/дл в мкмоль/л - 5,678.

В норме содержание аскорбиной кислоты в крови составляет 40-114 мкмоль/л, или 0,7-2,0 мг/дл; в плазме - 40-70 мкмоль/л, или 0,7-1,2 мг/дл.